[发明专利]一种新型蛋白质生物素连接酶及基于其的邻近标记系统PhastID有效
| 申请号： | 202111302493.0 | 申请日： | 2021-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN114149980B | 公开（公告）日： | 2023-10-13 |
| 发明（设计）人： | 松阳洲;冯然;刘峰;吴苏;李克成;李影影;周志芬;李若菲;刘熠 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12N15/52;C12N15/85;C12N5/10;C12N15/867;C12N15/62;C07K1/13 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 赵崇杨 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 蛋白质 生物素 连接酶 基于 邻近 标记 系统 phastid | ||
1.一种蛋白质生物素连接酶BPL，其特征在于，
(a)其氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所述；
或
(b)与SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所述氨基酸序列具有70％以上同源性且具有生物素蛋白连接酶活性的蛋白。
2.一种突变蛋白质生物素连接酶BPL*，其特征在于，为SEQ ID NO.1所述氨基酸序列R48G或R48S突变；或SEQ ID NO.2所述氨基酸序列R48G或R48S突变；或SEQ ID NO.3所述氨基酸序列R40G突变。
3.一种编码权利要求2所述突变蛋白质生物素连接酶BPL*的核苷酸序列。
4.一种包含权利要求3所述突变蛋白质生物素连接酶BPL*编码核苷酸序列的重组表达载体。
5.一种包含权利要求4所述重组表达载体的宿主细胞。
6.权利要求1所述的蛋白质生物素连接酶BPL或权利要求2所述突变蛋白质生物素连接酶BPL*在邻近蛋白标记或在制备邻近蛋白标记系统中的应用。
7.一种包含权利要求1所述蛋白质生物素连接酶BPL或权利要求2所述突变蛋白质生物素连接酶BPL*的邻近蛋白标记系统。
8.一种邻近蛋白标记方法，其特征在于，先将待研究的目的蛋白与权利要求2的突变蛋白质生物素连接酶BPL*形成融合蛋白，经生物素标记，通过生物素-亲和素系统，纯化出目的蛋白周围被生物素连接酶标记的蛋白，再通过高通量的方法进一步鉴定出与之有相互作用的蛋白。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述生物素浓度为0.5μM～50μM。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述标记时间为10min～16h。
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