[发明专利]固定脂肪酶的方法

说明书

公开了一种将脂肪酶固定到含有氨基官能团的支持物上的方法，所述方法包括在表面活性材料的存在下使所述脂肪酶与所述支持物接触。

技术领域

本发明涉及将脂肪酶固定到具有氨基官能团的支持物上的方法，采用所述固定的脂肪酶产生甘油三酯组合物的方法，以及脂肪酶在酯交换反应中的应用。

背景技术

脂肪酶(E.C.3.1.1.3)属于酶家族，特异性催化三-、二和单酰基甘油的酯键形成甘油和脂肪酸。它们还能催化诸如相互酯化、酯化、酸解、醇解和氨解的其他反应。脂肪酶的高成本导致酶促反应在经济上不具吸引力。脂肪酶的固定是提高脂肪酶工业敏感性的一种途径并且能够回收脂肪酶蛋白。采用各种途径预先处理支持物或者脂肪酶可以将脂肪酶固定在不同的支持物上。

Nevena等(NEVENA,Z.将来自皱褶念珠菌的脂肪酶固定到赛帕珠上：高碘酸氧化脂肪酶的作用(Immobilization of lipase from Candida rugosa on Sepabeads:theeffect of lipase oxidation by periodates).Bioprocess Biosyst Eng.2011,第34篇,第803-810页)描述了使用某些具有氨基官能团或者环氧基团的作为固定来自皱褶念珠菌的非特异性脂肪酶的合适的支持物。具有氨基官能团的需要用戊二醛或高碘酸活化以显示其改善的活性。

Palomo等(PALOMO,Jose M等，脂肪酶在高度疏水的支持物(十八烷基-赛帕珠)上的界面吸附：脂肪酶的开放形式的固定、过度活化和稳定，Journal of MolecularCatalysis B:Enzymatic.2002,第19期，第20篇，第279-286页)测试了各种脂肪酶在高度疏水支持物(例如十八烷基-上的固定。

酶活性易受到固定试剂如戊二醛或固定支持物的影响。为了确保酶固定后的稳定性和活性，常常加入非脂肪酶蛋白如鸡蛋白蛋白或牛血清白蛋白。然而，已知这些动物蛋白质可导致过敏反应。

仍然需要简化的固定方法而不需要预先活化支持物，并且需要正确选择保留脂肪酶活性和稳定性以利于商业相关甘油三酯组合物的制备的支持物。

发明内容

本发明的目的是提供一种固定方法，其中可以避免支持物的预先活化，并且如果确实这样的话，疏水支持物如具有十八烷基的(EC-OD)能够进行酯交换反应以获得商业上重要的产物。本发明的另一个目的是提供一种固定方法，所述方法避免用非脂肪酶蛋白如动物来源的白蛋白的处理以确保脂肪酶的活性和稳定性而制备甘油三酯组合物。

根据本发明，提供了一种在表面活性材料的存在下将脂肪酶固定到具有氨基官能团的支持物上的方法。术语氨基官能团指致力于与脂肪酶相互作用或结合的氨基基团。

本发明的另一方面是采用固定到具有氨基官能团的支持物上的脂肪酶，通过酶促酯交换制备甘油三酯的方法。

本发明的另一方面还提供了固定的脂肪酶在制备包含至少15％OPO的甘油三酯脂肪组合物中的应用。

具有氨基官能团的支持物可以是具有氨基官能团如氨基-环氧、或具有C1-C24，优选的是C2-C10碳链的烷基氨基的支持物。所述支持物包含甲基丙烯酸类聚合物。优选的是所述聚合物形成基质。

本发明优选的支持物含有烷基氨基官能团，如乙基氨基或己基氨基。

支持物与脂肪酶之间的作用机制或者是通过离子相互作用或者是化学结合，优选离子相互作用。

表面活性剂可以由糖(单糖、双糖或多糖)，多元醇(例如去水山梨糖醇和山梨醇)或者分子量为350到35000的聚乙二醇如PEG600、1500、4000形成。尤其合适的非离子表面活性剂是聚氧乙烯去水山梨糖醇C8-C24脂肪酸酯，具体是源自月桂酸的那些，例如吐温或者源自油酸的那些，例如吐温