[发明专利]酵母细胞线粒体移植乳腺肿瘤细胞的构建培养方法

说明书

本发明属于工程细胞的构建和培养领域，具体涉及一种酵母细胞线粒体移植乳腺肿瘤细胞的构建培养方法。所述构建培养方法为：首先培养酿酒酵母细胞；然后经多步差速离心法，获得酵母细胞线粒体粗提物；将酵母细胞线粒体粗提物利用蔗糖密度梯度离心法，获取纯化的酵母细胞线粒体；将纯化的酵母细胞线粒体以添加至96孔板培养的MDA‑MB‑231乳腺肿瘤细胞的培养液中，孵育培养即可。本发明所培养的工程细胞，具有较快的生长速度，能在较短的时间内达到实验所需的细胞数量，大大缩短了实验周期。本发明所述的工程细胞构建方法，较为简单，原材料成本较低。本发明所构建的工程细胞，具有与原细胞系相同的细胞性质，能够较好地满足实验要求。

技术领域

本发明属于工程细胞的构建和培养领域，具体涉及一种酵母细胞线粒体移植乳腺肿瘤细胞的构建培养方法。

背景技术

随着肿瘤疾病在人类疾病当中的发病率以及致死率的日益升高，攻克癌症这一世界性难题，已经困扰了人类数十年，其中，乳腺肿瘤细胞尤为突出，其在女性当中的发病率呈现逐年升高，发病年龄逐年降低的态势，世界各国科研工作者和医学工作者，都在为研制新型抗癌药物夜以继日的工作。随着每一种新型药物的研发，其先导一定是以相对应的体外肿瘤细胞作为试验对象，所以，能够在更短的时间内，获得试验所要求的肿瘤细胞数量至关重要，研制过程每缩短一秒钟，就意味着可以多挽救一个生命。

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），又称面包酵母或者出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，用于制作面包和馒头等食品及酿酒。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径5-10μm。其繁殖的方法为出芽生殖。酿酒酵母与同为真核生物的动物和植物细胞具有很多相同的结构，又容易培养，酵母被用作研究真核生物的模式生物。酿酒酵母被认为是最具潜力的大规模生产菌种。 酿酒酵母是第一个完成基因组测序的真核生物，测序工作于1996年完成。酿酒酵母具有生长周期短、发酵能力强、容易进行大规模培养以及含有多种蛋白质、氨基酸、维生素、生物活性物质等丰富的营养成分等优点，一直是基础及应用研究的主要对象，在食品、医药等领域应用广泛。

线粒体（mitochondrion）是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所。其直径在0.5到1.0微米左右。大多数真核细胞或多或少都拥有线粒体。除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种酵母细胞线粒体移植乳腺肿瘤细胞的构建培养方法，该方法构建了一种乳腺肿瘤类的工程细胞，与普通乳腺肿瘤细胞相比较，该种细胞具有更快的生长速度，能够在更短的时间内生长到实验所需的细胞数量，大大缩短了实验周期。

为实现上述目的，本发明所采用的具体技术方案如下：

本发明提供了一种酵母细胞线粒体移植乳腺肿瘤细胞的构建培养方法，包括以下步骤：

（1）将平板培养基上的酿酒酵母菌接种于液体培养基中，放置于摇床培养至对数生长期，得酿酒酵母细胞；

（2）将液体培养基倒入离心管中，经多步差速离心法，获得酵母细胞线粒体粗提物；

（3）将酵母细胞线粒体粗提物置于超速离心管中，利用蔗糖密度梯度离心法，获取纯化的酵母细胞线粒体；

（4）将纯化的酵母细胞线粒体以190μg/ml的浓度添加至96孔板培养的MDA-MB-231乳腺肿瘤细胞的培养液中，共孵育培养12小时，即得到含有酵母细胞线粒体的乳腺肿瘤细胞。

进一步的，步骤（1）中，所述酿酒酵母细胞具体的培养方法为：

1）称取2.5%葡糖糖、2.5%蛋白胨、1%酵母浸粉，用蒸馏水溶解，定容；