[发明专利]脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种脂肪间充质干细胞的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基包括基础培养基和添加物；其中，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述添加物由转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物组成；所述转铁蛋白的浓度为8~22μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为10~25μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为10~30ng/mL，所述纤连蛋白的浓度为50~80μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为12mg/mL，所述党参提取物的浓度为10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为12mg/mL；

其中，所述党参提取物的制备步骤包括：

取党参药材，采用水煮沸所述党参药材，收集滤液，重复1~3次，合并滤液，得到提取物；

采用乙醇溶液对所述提取物进行沉淀处理，对上清液进行分离纯化，得到所述党参提取物；

所述黄芪甲苷的制备步骤包括：

取黄芪药材，采用温度为50~60℃的水浸泡所述黄芪药材，重复1~3次，收集滤液；

向收集到的所述滤液中添加碳酸钠溶液，在温度为50~70℃的条件下热处理后，添加乙醇分离得到醇提取物，干燥得到所述黄芪甲苷；

所述芦荟提取物的制备步骤包括：

获取新鲜的芦荟叶，去除所述芦荟叶的表皮后，进行破碎处理，得到破碎后的芦荟；

在蒸气量为芦荟重量的20％的条件下对所述破碎后的芦荟进行蒸汽处理后，采用用量为芦荟重量的75％的水冲洗得到混合液，过滤，滤液为芦荟提取物。

2.如权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基中，所述转铁蛋白的浓度为10~20μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为12~22μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为12~25ng/mL，所述纤连蛋白的浓度为55~75μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为12mg/mL，所述党参提取物的浓度为10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为12mg/mL。

3.如权利要求2所述的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基中，所述转铁蛋白的浓度为15μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为20μg/mL，所述成纤维细胞生长因子的浓度为20ng/mL，所述纤连蛋白的浓度为70μg/mL，所述黄芪甲苷的浓度为12mg/mL，所述党参提取物的浓度为10mg/mL，所述芦荟提取物的浓度为12mg/mL。

4.一种如权利要求1~3任一项所述的脂肪间充质干细胞的无血清培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

分别获取转铁蛋白、重组人胰岛素、成纤维细胞生长因子、纤连蛋白、黄芪甲苷、党参提取物和芦荟提取物；

将所述转铁蛋白、所述重组人胰岛素、所述成纤维细胞生长因子、所述纤连蛋白、所述黄芪甲苷、所述党参提取物和所述芦荟提取物与DMEM/F12培养基进行混合处理，得到脂肪间充质干细胞的无血清培养基。

5.如权利要求4所述的无血清培养基的制备方法，其特征在于，获取所述党参提取物的步骤包括：

取党参药材，采用水煮沸所述党参药材，收集滤液，重复1~3次，合并滤液，得到提取物；

采用第一乙醇溶液对所述提取物进行沉淀处理，对上清液进行分离纯化，得到所述党参提取物；

和/或，获取所述黄芪甲苷的步骤包括：

取黄芪药材，采用温度为50~60℃的水浸泡所述黄芪药材，重复1~3次，收集滤液；

向收集到的所述滤液中添加碳酸钠溶液，在温度为50~70℃的条件下热处理后，添加第二乙醇分离得到醇提取物，干燥得到所述黄芪甲苷；

和/或，获取所述芦荟提取物的步骤包括：

获取新鲜的芦荟叶，去除所述芦荟叶的表皮后，进行破碎处理，得到破碎后的芦荟；

对所述破碎后的芦荟进行蒸汽处理后，冲洗得到混合液，过滤得到芦荟提取物。