[发明专利]一种成纤维细胞激活修复方法

说明书

本发明公开了一种成纤维细胞激活修复方法，涉及创口修复技术领域，包括以下步骤，首先，利用组织截取装置从小鼠成纤维细胞组织处剪切1‑3mm的碎块，然后将该碎块置于试管内，向试管内加入适量的胰酶，然后将其置于培养箱内培养15‑20分钟，取出试管，利用试管摇匀装置对试管进行反复晃动，晃动后加入培养液终止胰酶对组织的消化，用离心装置对试管内的培养液进行离心，离心1000转，离心的时间控制在5‑8分钟，离心后，利用吸取装置吸取掉试管内的上层清液，然后再向试管内加入适量培养液，再对试管晃动15‑20次。本发明整个修复过程设计合理，采用实验室普通的器械即可完成，操作便捷，同时又能取得良好的修复效果。

技术领域

本发明涉及创口修复技术领域，尤其涉及一种成纤维细胞激活修复方法。

背景技术

成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。体外培养的成纤维细胞多为梭形、多角形和扁平星形等，其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。电镜下，其胞质可见丰富的粗面内质网、游离核糖体和发达的高尔基复合体。处于成熟期或称静止状态的成纤维细胞，胞体变小，呈长梭形，粗面内质网和高尔基复合体均不发达。它具有较强的分裂增殖能力，适应性强，是最容易培养的动物细胞类型之一。

在生物学研究领域，常常涉及到利用成纤维细胞激活修复创口，这就用到激活修复方法，现有的激活修复方法得到成纤维细胞悬液的过程复杂，同时得到的悬液对创口组织的修复效果比较差，显然已经无法满足人们的使用需求。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的现有的激活修复方法得到成纤维细胞悬液的过程复杂，同时得到的悬液对创口组织的修复效果比较差的缺点，而提出的一种成纤维细胞激活修复方法。其优点在于整个修复过程设计合理，采用实验室普通的器械即可完成，操作便捷，同时又能取得良好的修复效果。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种成纤维细胞激活修复方法，包括以下步骤：

S1：首先，利用组织截取装置从小鼠成纤维细胞组织处剪切1-3mm的碎块，然后将该碎块置于试管内，向试管内加入适量的胰酶，然后将其置于培养箱内培养15-20分钟，取出试管，利用试管摇匀装置对试管进行反复晃动，晃动后加入培养液终止胰酶对组织的消化；

S2：利用离心装置对试管内的培养液进行离心，离心1000转，离心的时间控制在5-8分钟，离心后，利用吸取装置吸取掉试管内的上层清液，然后再向试管内加入适量培养液，再对试管晃动15-20次；

S3：摇匀后，将试管再次置于培养箱内，控制培养条件为温度37摄氏度、5％浓度的二氧化碳和足够的湿度进行培养，培养3-7天后，细胞会相互重叠爬满整个培养瓶，再次利用吸取装置吸取掉试管内的上层清液，再次加入0.25％浓度的胰酶至试管内进行消化，利用监测装置进行观察，当少量细胞漂浮，贴壁的细胞层出现裂隙时，即刻加入培养液终止消化，再次利用离心装置进行离心，离心后吸取上层清液，接着加入足够多的培养液，即可制成成纤维细胞悬液；

S4：将制成的成纤维细胞悬液注入至受伤小鼠的体内，然后每间隔一端时间利用监测装置观察小鼠创口的变化情况，所述变化情况包括伤后第3天及伤后第14天的变化情况，

在伤后第3天的创面内纤维素凝快中尚无成纤维细胞浸润，仅有FN与VN作为成纤维细胞迁移、增殖和合成ECM的暂时性支架载体,同时成纤维细胞才由静止表型向迁移型转换，并逐渐向创伤中心迁移，迅速增殖，大量合成胶原，此种合成表型的成纤维细胞的特征是细胞内含有丰富的粗面内质网和高尔基体；