[发明专利]用于中药材雀脑成分快速检测的引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.用于检测中药材雀脑成分的引物，其特征在于，其包括如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示的序列。

2.一种中药材雀脑成分的快速检测试剂盒，其特征在于，其包括如上所述的引物对。

3.如权利要求2所示的快速检测试剂盒，其特征在于，其还包括核酸检测试纸条，SEQID NO.1所示序列的5’端标记FITC或生物素，SEQ ID NO.2所示序列的5’端标记地高辛，所述核酸检测试纸条为检测线包被有山羊抗FITC的抗体/山羊抗生物素的抗体、质控线包被有羊抗鼠抗体和胶体金标记有小鼠抗地高辛抗体的胶体金试纸条。

4.如权利要求3所示的快速检测试剂盒，其特征在于，试剂盒还包括PCR Prime STARHS Premix和检测稀释液，所述检测稀释液的配方为含有0.3mol/L NaCl和30mmol/L的柠檬酸缓冲液，pH 7.0。

5.如权利要求4所示的快速检测试剂盒，其特征在于，还包含DNA提取试剂，DNA提取试剂包括裂解液和清洗液及DNA溶剂；所述裂解液的配方为含有1.0mol/L盐酸胍、1％TritonX-100，1.5％PVP，150mmol/L NaCl，0.5％的聚山梨酯-20，5mmol/L EDTA，1.5％的聚乙二醇，溶剂为pH 7.4的PBS溶液；所述清洗液的配方为含有0.15％聚山梨酯-20的PBS，pH为7.4，所述DNA溶剂为TE缓冲液。

6.一种中药材雀脑成分的快速检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(1)样品DNA的提取；

(2)对步骤(1)获得的DNA模板，采用如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列上、下游引物进行PCR扩增；其中，上游引物的5’端标记有FITC或生物素，反向引物的5’端标记有地高辛；

(3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物用核酸检测试纸条进行结果判定。

7.如权利要求6所示的快速检测方法，其特征在于，在步骤(1)中，提取DNA的方法为称取经炮制样品研成粉状或鲜雀脑样品研成粉状或糊状0.02～0.05g，置于2mL离心管中，加入500μL裂解液裂解样品7s，将滤纸条的一端浸入裂解液中3s以吸附核酸，之后将滤纸条转移至1750μL清洗液中3s以清洗表面吸附的杂质；最后将滤纸条转移至配制好的50μL的TE缓冲液中1min，以洗脱表面吸附的核酸；所述裂解液的配方为含有1.0mol/L盐酸胍、1％Triton X-100，1.5％PVP，150mmol/L NaCl，0.5％的聚山梨酯-20，5mmol/L EDTA，1.5％的聚乙二醇，溶剂为pH 7.4的PBS溶液；

所述清洗液的配方为含有0.15％聚山梨酯-20的PBS，pH为7.4。

8.如权利要求6所示的快速检测方法，其特征在于，在步骤(2)中，扩增体系包括：PCRPrime STAR HS Premix 25μL、浓度10μmol/L的上、下游引物各0.25μL、模板1μL、补水至50μL；

所述PCR扩增反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s；63℃退火30s，30个循环，72℃延伸5min。

9.如权利要求6所示的快速检测方法，其特征在于，核酸检测试纸条为检测线包被有山羊抗FITC的抗体/山羊抗生物素的抗体，质控线包被有羊抗鼠抗体，胶体金标记有小鼠抗地高辛抗体的胶体金试纸条，将扩增产物用检测稀释液稀释后滴入核酸检测试纸条的加样处进行检测，所述检测稀释液的配方为含有0.3mol/L NaCl和30mmol/L的柠檬酸缓冲液，pH7.0。

10.如权利要求9所示的快速检测方法，其特征在于，加样后5-8分钟判读，得到相应的检测结果，其他时间判读无效；读取结果时，

当检测线T线和质控线C线均显色时，说明样品中含有雀脑成分；

当检测线T线不显色、质控线C线显色时，说明样品中不含有雀脑成分；当质控线C线不显色时，说明操作不当或试纸已经失效，应重新检测。