[发明专利]用于中药材雀脑成分快速检测的引物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及用于中药材雀脑成分快速检测的引物、试剂盒及检测方法。通过核酸薄膜层析检测试纸条，能够实现核酸检测结果的可视化观察。本发明通过核酸检测试纸检测中药材雀脑成分，且单一样品从前处理到完成检测，仅需65‑70min即可得出检验结果，并且与其它常见动物源性成分无非特异性反应，本发明的检测试纸条操作简便、特异性强、灵敏度高、所需设备成本低、效率高，尤其适用于现场快速检测以及基层监管单位的市场快速检测。

技术领域

本发明涉及用于中药材雀脑成分快速检测的引物、试剂盒及检测方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

雀脑为文鸟科动物麻雀(Passer montanus saturatus Stejneger)的新鲜脑组织经加工炮制而成，始载于《名医别录》，并且《本草纲目》、《食疗本草》、《动物本草》、《滇南本草》、《现代养生保健中药辞典》、《中国动物志》、《中国动物药志》、《中药大辞典》、《肉禽蛋奶养生》、《中华本草》等均有记载。雀脑味甘，性平，归肾经，具有补肾兴阳，润肤生肌的作用，主治肾虚阳痿，耳聋，聤耳，冻疮等，对手足皲裂、冻疮等症可外涂患处；肾虚则应内服之。应用制剂为龟龄集胶囊和右归丸。

雀脑为冷备药材，其检测方法少有研究，《山西省中药材标准》规定雀脑含量测定为总氮，因雀脑富含蛋白质、氨基酸。目前文献报道雀脑质量控制包括整体质量控制和有效成分质量控制，整体质量控制包括性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别、水分和灰分的检查、总氮、氨基酸等项目。雀脑的性状鉴别特征是颜色、气味基本与肉粉相同；显微鉴别特征为树突碎片与神经纤维，只是任何非低等生物脑组织的一般特征；含量测定及薄层检测氨基酸类和鉴别丙氨酸成分，也不具有专属性，氨基酸是生物体的最基本成分，丙氨酸是一种普遍存在的氨基酸，生物组织包括发酵液和毛发水解物都有氨基酸和丙氨酸；水分和灰分是药材的一般检查项目；总氮在自然界广泛存在，尤其在有机体中都有，甚至空气中也有氮存在。有效成分质量控制采用柱前衍生化HPLC法测定丙氨酸，如前所述，丙氨酸是一种生物体中普遍存在的氨基酸。所以无论是整体质量控制指标还是目前的单一有效成分控制指标都不能够真正鉴别或控制雀脑的质量，添加部分生物体与其它非低等生物体的脑组织都符合以上标准，所以目前雀脑的鉴别检测方法专属性不强。依据文献计算，氨基酸分析法最低能检出2.0μg样品，HPLC衍生化法检测丙氨酸最低能检出0.5μg样品，薄层色谱法最低能检出80μg样品。

近年来随着分子生物学的深入研究与快速发展，实际检验中药材真伪鉴定方法已经由传统的单一理化实验水平转移到分子生物学的方法如普通PCR技术、实时荧光PCR技术、PCR-RFLP等技术。聚合酶链式反应通过特定引物有选择性的进行体外模拟细胞内部扩增DNA或RNA片段的方法，该DNA复制方法可以实现将极少量基因组中的特定基因片段在短几小时内呈现指数扩增，显著提高检测的灵敏度已成为目前研究水平上最灵敏的检测技术，具有精确度高和特异性强的优势，在中药材真伪检测及基因突变的检测等诸多领域发挥重要作用。然而，目前还没有发现适用于中药材雀脑成分的PCR检测的引物，且普通PCR检测技术存在局限性，需要电泳检测才能观察检测结果，而实时荧光PCR检测设备价格是普通PCR检测设备的5至10倍，这些因素限制了其在设施缺乏的现场检测和基层地区应用。

因此，建立快速、敏感、特异的检测方法对于保障人民群众用药安全是必不可少的。亟需建立一种快速、有效、专属的雀脑成分检测方法，对于规范该药材的采收加工、市场流通、临床用药及涉及的相应制剂的质量控制具有积极意义。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术的上述问题，本发明提供用于快速、准确、灵敏的雀脑成分核酸快速检测引物、试剂盒及检测方法。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

用于检测中药材雀脑成分的引物，其包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列。