[发明专利]一种CAR-T细胞无血清培养基及其培养方法

说明书

本发明公开了一种CAR‑T细胞无血清培养基，由基础培养基和添加在培养基中的以下成分组成：尼麦角林、淫羊藿苷、阿魏酸酯、IL‑2、IL‑15、维生素E、L‑谷氨酰胺。本发明的CAR‑T细胞无血清培养基中添加尼麦角林、淫羊藿苷，能有效提高CAR‑T细胞的增殖活性，在短时间内可收获大量CAR‑T细胞。还添加阿魏酸酯有助于提高收获的细胞中活细胞的数量，提高细胞存活率。上述成分和L‑2、IL‑15、维生素E、L‑谷氨酰胺共同作用，提高了CAR‑T细胞的增殖活性，并且所用成分安全，不添加血浆等血液成分，降低了CAR‑T细胞的培养成本，减轻患者负担。本发明还提供了一种CAR‑T细胞的培养方法，操作简便，易于实现，有利于CAR‑T细胞在肿瘤免疫治疗领域的推广应用。

技术领域

本发明涉及免疫细胞领域，尤其涉及一种CAR-T细胞无血清培养基及其培养方法。

背景技术

T细胞也叫T淋巴细胞，是人体白细胞的一种，来源于骨髓造血干细胞，在胸腺中成熟，然后移居到人体血液、淋巴和周围组织器官，发挥免疫功能。其作用相当于人体内的“战士”，能够抵御和消灭“敌人”如感染、肿瘤、外来异物等。

随着T淋巴细胞肿瘤免疫应答机制的研究日益受到重视，嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗正在成为肿瘤免疫治疗领域的一个新的免疫治疗策略。在实验室，技术人员通过基因工程技术，将T细胞激活，并装上定位装置CAR（肿瘤嵌合抗原受体）即CAR-T细胞，CAR-T细胞疗法是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，它们能高效地杀灭肿瘤细胞，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。

使用CAR-T细胞治疗肿瘤的流程包括采集患者外周血、分离T细胞、将CAR导入T细胞、体外培养扩增CAR-T细胞以及将细胞回输至患者。在实际治疗中往往需要大量的CAR-T细胞。因此需要在体外培养大量扩增CAR-T细胞，一般一个患者需要上亿，乃至几十亿个CAR-T细胞，体型越大，需要细胞越多，而CAR-T细胞体外扩增的效率会很大程度上影响患者的治疗成本。同时CAR-T细胞的存活率会直接影响CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果，因此有必要研究一种CAR-T细胞体外扩增培养基，提高扩增效率和治疗效果，同时降低治疗成本。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种CAR-T细胞无血清培养基，提高CAR-T细胞的增殖效率，降低培养成本。

本发明的目的之二在于提供一种CAR-T细胞的培养方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种CAR-T细胞无血清培养基，由基础培养基和添加在培养基中的以下成分组成：尼麦角林、淫羊藿苷、阿魏酸酯、IL-2、IL-15、维生素E、L-谷氨酰胺。

进一步地，各成分在培养基中浓度为：尼麦角林2.5-3.5ng/mL、淫羊藿苷6.8-9.6ng/mL、阿魏酸酯8.5-10 ng/mL、IL-2 100-200IU/mL、IL-15 300-500 IU/mL、维生素E20-30μg/mL、L-谷氨酰胺10-18μg/mL。

进一步地，各成分在培养基中浓度为：尼麦角林2.8ng/mL、淫羊藿苷8.2ng/mL、阿魏酸酯9.4ng/mL、IL-2 150IU/mL、IL-15 400 IU/mL、维生素E 25μg/mL、L-谷氨酰胺15μg/mL。

进一步地，所述基础培养基为X-VIVO 15培养基。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种CAR-T细胞的培养方法，采用上述培养基培养。