[发明专利]一种构建脐带间充质干细胞库用冻存保护液及细胞库的构建方法

说明书

本发明公开了一种构建脐带间充质干细胞库用冻存保存液，包括培养基和添加在培养基中以下成分：腺苷、卡瓦胡椒内酯、镰叶芹二醇、丙酸钾、羟乙基淀粉注射液、硫辛酸、维生素E、L‑谷氨酰胺。本发明提供的冻存保存液中不添加DMSO和动物血清，成分安全，各成分协同作用，减少在降温以及冻存过程中对细胞造成的损害，保证细胞库中的细胞在应用时具有较好的活性。本发明还提供了一种脐带间充质干细胞库的建立方法，采用本发明的冻存保护液，使细胞库中的细胞在经冻存后仍具有较好的增殖活性，保证在科研或者临床应用的效果。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种脐带间充质干细胞库用冻存保护液及细胞库的构建方法。

背景技术

脐带间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景。脐带间充质干细胞（MSCs）具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。有报道从人脐带中分离出MSCs，且细胞含量、增殖能力优于骨髓MSCs，免疫原性比骨髓MSCs低，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。

脐带间充质干细胞具有较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提高细胞或器官移植的成功率。能促进造血恢复功能，与单一造血干细胞移植比较，间充质干细胞和造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果。能修复损伤或病变的组织器官，用于治疗骨和肌肉衰退性疾病、心脑血管疾病、肝病、脑及脊髓神经损伤和老年痴呆等。

为了保证脐带间充质干细胞的应用，需要建立细胞库保存一定数量的细胞。细胞库的构建过程中，培养得到的细胞需要经过降温过程保存在超低温的液氮中，在使用时进行复苏，但是该过程由于经历降温至超低温过程和复温过程，会对细胞活性造成损伤，导致细胞活率下降，增殖及分化能力变差，影响后续细胞库中细胞的应用，因此如何保证细胞库中的细胞在经过超低温保存后仍具有较好的质量显得尤为重要。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种构建脐带间充质干细胞库用冻存保护液，提高细胞库中细胞的复苏率，保证经超低温保存后的脐带间充质干细胞的活率以及增殖活性。

本发明的目的之二在于提供一种脐带间充质干细胞库的构建方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种构建脐带间充质干细胞库用冻存保存液，包括培养基和添加在培养基中以下成分：腺苷、卡瓦胡椒内酯、镰叶芹二醇、丙酸钾、羟乙基淀粉注射液、硫辛酸、维生素E、 L-谷氨酰胺。

进一步地，所述培养基为DMEM低糖培养基。

进一步地，各成分在培养基中的终浓度为：腺苷1-5μg/mL、卡瓦胡椒内酯9-12.5ng/mL、镰叶芹二醇10-15 ng/mL、丙酸钾5-10μg/mL、羟乙基淀粉注射液10-15μg/mL、硫辛酸0.5-0.8 μg/mL、维生素E 3.5-5μg/mL、L-谷氨酰胺6.5-8.5μg/mL。

进一步地，各成分在培养基中的终浓度为：腺苷3μg/mL、卡瓦胡椒内酯10.5ng/mL、镰叶芹二醇12ng/mL、丙酸钾8μg/mL、羟乙基淀粉注射液12.5μg/mL、硫辛酸0.7 μg/mL、维生素E 4μg/mL、L-谷氨酰胺7μg/mL。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种脐带间充质干细胞库的构建方法，采用上述的冻存保护液。