[发明专利]一种HER2阳性胃癌免疫微环境特征的分析方法及应用

权利要求书

1.一种 HER2 阳性胃癌免疫微环境特征的分析方法，其特征在于，所 述方法以 HER2阳性胃癌患者的活检病理切片为分析载体，通过对病理切 片免疫微环境中的细胞进行免疫荧光染色示踪定位，通过分析肿瘤细胞与 免疫细胞之间，或者不同免疫细胞类型之间的细胞核间距，捕捉 HER2 阳 性胃癌免疫微环境特征；所述免疫微环境中的细胞包括胃粘膜上皮细胞、 HER2 表达阳性上皮细胞，NK 细胞、NKT 细胞、M2 巨噬细胞、B 淋巴细胞、 Treg细胞和 CTL 细胞；

以 0-10 微米、10-20 微米、20-30 微米为统计分析维度，作为细胞之 间的共定位互作的细胞核间距离衡量范围，并通过进行空间距离聚类分析， 计算具有 0-10 微米、10-20微米、20-30 微米为距离临近细胞相匹配的细 胞数量，并归一化为在细胞总类型中所占比率，以此来计算细胞类型的有 效百分比，捕捉所述 HER2 阳性胃癌免疫微环境特征；

所述方法具体包括：

步骤 (1) 对 HER2 阳性胃癌患者的活检病理切片进行 HE 染色，确定 发生癌变的肿瘤核心区域和非癌变的癌旁区域；

步骤 (2) 病理免疫微环境中细胞的荧光染色示踪与定位，所述细胞 包括胃粘膜上皮细胞、HER2 表达阳性上皮细胞，NK 细胞、NKT 细胞、M2 巨噬细胞、B 淋巴细胞、Treg 细胞和 CTL 细胞；

步骤 (3) 对免疫荧光标记后的切片样本进行全景扫描，并对照 HE 染 色的病理区域划分，对癌变区域进行精细扫描；

步骤 (4) 对癌变区域的图像进行亚微结构的精细拆分、细胞类型区 别、蛋白Marker表达相对定量分析；

步骤 (5) 免疫细胞极性化分布特征的分析，包括对微环境中能够与 肿瘤上皮细胞共定位的 CTL 细胞、NK 细胞、M2 巨噬细胞、B 细胞、Treg 细胞各自所占比率进行分析，以及对微环境中与 NK 细胞、NKT 细胞共定位 的 CTL 细胞所占比率和与 Treg 细胞、M2 巨噬细胞共定位的 B 细胞所占比 率进行分析。

2.根据权利要求 1 所述的分析方法，其特征在于，所述步骤 (2) 中， 染色组合分为2 个，第一个的组合为 DAPI/PanCK/HER2/CD3/CD8/CD56，用 于定位细胞核、胃粘膜上皮细胞、HER2 表达阳性上皮细胞、CTL 细胞、NK 细胞、NKT 细胞；第二个的组合为 DAPI/PanCK/HER2/CD20/CD163/Foxp3， 用于定位细胞核、胃粘膜上皮细胞、HER2 表达阳性上皮细胞、B淋巴细胞、 M2 巨噬细胞、Treg 细胞。

3.根据权利要求 1 所述的分析方法，其特征在于，所述步骤 (4) 中， 将癌变区域拆分为 Her2 表达阳性区域，Her2 表达阴性区域，间质区域。

4.根据权利要求 1 所述的分析方法，其特征在于，所述步骤 (2) 中 使用mIHC 技术对胃癌样本进行多重荧光染色。

5.根据权利要求 1 所述的分析方法，其特征在于，所述步骤 (3) 中， 使用PolarisSystem 对免疫荧光标记后的切片样本进行全景扫描。

6.根据权利要求 1 所述的分析方法，其特征在于，所述步骤 (4) 中， 使用 InForm细胞分析软件对癌变区域的图像进行亚微结构的精细拆分、 细胞类型区别、蛋白Marker表达相对定量分析。

7.根据权利要求 1 所述的分析方法，其特征在于，所述步骤 (1) 中， 所述病理切片厚度为 4 微米。