[发明专利]一种HER2阳性胃癌免疫微环境特征的分析方法及应用

说明书

本发明公开了一种HER2阳性胃癌免疫微环境特征的分析方法及应用，该方法以HER2阳性胃癌患者的活检病理切片为为分析载体，通过对病理切片免疫微环境中的细胞进行免疫荧光染色示踪定位，通过分析肿瘤细胞与免疫细胞之间，或者不同免疫细胞类型之间的细胞核间距，捕捉HER2阳性胃癌免疫微环境特征。为HER2阳性胃癌免疫微环境的研究提供技术支持。

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种HER2阳性胃癌免疫微环境特征的分析方法及应用。

背景技术

胃癌是我国第二大癌症，发病率和死亡率高于全球平均水平。中国胃癌患者占全球胃癌患者数量的48％。与此同时，中国早期胃癌诊治率低，仅有15％左右，80％-90％的患者诊断时已经进展为晚期，由于治疗方法有限，这类患者预后较差，巨大的临床需求得不到满足。HER2阳性胃癌是一类特殊类型的胃癌。多项国外大样本研究分析表明，胃癌中HER2的阳性率为7.3％-20.2％。国内多中心研究数据显示，中国胃癌患者的HER2阳性率为12％-13％。HER2的突变与扩增，可激活下游的两个主要的信号转导途径：MAPK通路，PI3K/Akt通路，从而引发连锁反应，调节凋亡等相关基因，促进细胞无限增值分化，抑制凋亡，发生癌变。此外，HER2的过表达，信号通路的激活，会协同TGF-β促进上皮间质转化现象(EMT，epithelial-mesenchymaltransition)和肿瘤细胞迁移相关的基因的表达，促进癌变进程。通过TGF-β通路实现对免疫微环境的调控。目前对HER2阳性胃癌免疫微环境的研究比较少，缺乏有效的分析模型与方法。亟待建立一种分析方法可以相对系统的评价出HER2阳性晚期胃癌免疫微环境中免疫细胞的极性化分布特征。

发明内容

本发明提供了一种HER2阳性胃癌免疫微环境特征的分析方法，所述方法以HER2阳性胃癌患者的活检病理切片为分析载体，通过对病理切片免疫微环境中的细胞进行免疫荧光染色示踪定位，通过分析肿瘤细胞与免疫细胞之间，或者不同免疫细胞类型之间的细胞核间距，捕捉HER2阳性胃癌免疫微环境特征；所述免疫微环境中的细胞包括胃粘膜上皮细胞、HER2表达阳性上皮细胞，NK细胞、NKT细胞、M2巨噬细胞、B淋巴细胞、Treg细胞和CTL细胞。

进一步的，以0-10微米、10-20微米、20-30微米为统计分析维度，作为细胞之间的共定位互作的细胞核间距离衡量范围，并通过进行空间距离聚类分析，计算具有指定距离临近细胞相匹配的细胞数量，并归一化为在该细胞总类型中所占比率，以此来计算细胞类型的有效百分比，捕捉所述HER2阳性胃癌免疫微环境特征。

所述方法具体包括如下步骤：

(1)对HER2阳性胃癌患者的活检病理切片进行HE染色，确定发生癌变的肿瘤核心区域和非癌变的癌旁区域；

(2)病理免疫微环境中细胞的荧光染色示踪与定位，所述细胞包括胃粘膜上皮细胞、HER2表达阳性上皮细胞，NK细胞、NKT细胞、M2巨噬细胞、B淋巴细胞、Treg细胞和CTL细胞；

(3)对免疫荧光标记后的切片样本进行全景扫描，并对照HE染色的病理区域划分，对癌变区域进行精细扫描；

(4)对癌变区域的图像进行亚微结构的精细拆分、细胞类型区别、蛋白Marker表达相对定量分析；

(5)免疫细胞极性化分布特征的分析，包括对微环境中能够与肿瘤上皮细胞共定位的CTL细胞、NK细胞、M2巨噬细胞、B细胞、Treg细胞各自所占比率进行分析，以及对微环境中与NK细胞、NKT细胞共定位的CTL细胞所占比率和与Treg细胞、M2巨噬细胞共定位的B细胞所占比率进行分析。

其中，所述步骤(1)中，所述病理切片厚度为4微米。