[发明专利]与控制辣椒果实Vc含量基因连锁的SNP分子标记KQ8-3918及应用和专用引物

权利要求书

1.一种KASP特异性引物，用于鉴定辣椒果实Vc含量高低，所述特异性引物包括第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物，

第一正向引物的碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

第二正向引物的碱基序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

通用反向引物的碱基序列如序列表SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述KASP特异性引物，其特征在于，所述第一正向引物和第二正向引物的5’端分别连有不同的荧光接头序列。

3.根据权利要求2所述KASP特异性引物，其特征在于，所述荧光接头序列选择FAM、HEX、FITC、RED、TET、JOE、R110中的一种。

4.一种试剂盒，包括权利要求1-3任一项所述的KASP特异性引物和PCR反应试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应试剂为Touch-down PCR反应试剂。

6.权利要求1-3任一项所述的KASP特异性引物、或者权利要求4-5任一项所述的试剂盒在以下任一方面的应用：

(a)辅助选育高果实Vc含量的辣椒品种；

(b)鉴定辣椒果实Vc含量高低。

7.一种鉴定辣椒果实Vc含量高低的方法，包括如下步骤：

待测样品基因组DNA的提取；

以待测样品基因组DNA为模板，利用权利要求1-3任一项所述的KASP特异性引物进行PCR扩增；

对扩增产物进行荧光检测和分析，获得待测样品的基因型，由此确定待测样品果实Vc含量的水平；

当基因型为G:G和A:G时，待测样品为高果实Vc含量品种；当基因型为A:A时，待测样品为低果实Vc含量品种。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件依次为：94℃预变性15分钟；在94℃下变性20s；61℃-55℃下退火60s，共10个循环，61℃为第一个循环的退火温度，之后每个循环退火温度降低0.6℃；94℃变性20s；55℃复性/延伸60s，共26个循环。