[发明专利]新冠总抗体和中和抗体胶体金快速检测试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒总抗体和中和抗体胶体金快速检测试纸，其特征在于：所述试纸包含层析膜、缓冲垫、结合垫；所述层析膜上沿液体层析方向依次设有检测线T1和T2以及质控线，所述结合垫上已经预先吸附有先稀释的胶体金标记结合物，同时在层析膜和结合垫中间设有缓冲垫。

2.根据权利要求1所述的快速检测试纸，其中检测线T1线为鼠抗人IgG和IgM混合包被线，T2线为基因重组新型冠状病毒的细胞表面受体ACE2包被线。

3.根据权利要求1或2所述的快速检测试纸，其中质控线的包被物为为羊抗兔IgG抗体、羊抗鼠IgG抗体或DNP-BSA。

4.根据权利要求1-3任一项所述的快速检测试纸，其中缓冲垫为滤血膜或玻璃纤维。

5.根据权利要求1-4任一项所述的快速检测试纸，其中结合垫的一端喷涂有混合稀释的胶体金标记的基因重组新型冠状病毒刺突蛋白S1。

6.根据权利要求5所述的快速检测试纸，其中结合垫的另一端喷涂有混合稀释的胶体金标记的兔Ig抗体、鼠IgG抗体或兔抗DNP抗体。

7.根据权利要求1-6任一项所述的快速检测试纸，其中所述层析膜制备过程中包被液浓度为：鼠抗人IgG抗体和鼠抗人IgM浓度分别为0.3-0.6mg/mL、基因重组新型冠状病毒的细胞表面受体ACE2蛋白浓度为0.8-1.2mg/mL。

8.根据权利要求1-6任一项所述的快速检测试纸的制备方法，其中结合垫制备过程包括：

使柠檬酸和氯金酸溶于热水中制备胶体金溶液；

向胶体金溶液中加入碳酸钾、SARS-COV2-S1蛋白和牛血清白蛋白溶液，离心并收集沉淀；

向胶体金溶液中加入碳酸钾、兔IgG和牛血清白蛋白溶液，离心并收集沉淀；

将上述两种沉淀分别使用胶体金结合物稀释液进行稀释后，使用喷涂机在玻璃纤维垫子上。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其中结合垫制备过程包括：

量取1％柠檬酸三钠体积40毫升，2％氯金酸体积50毫升；将氯金酸加入到1000毫升纯化中，加热至沸腾，然后快速加入称取好的柠檬酸三钠，继续加热10分钟后，停止加热，待胶体金溶液冷却后，补加超纯水至1000g；

每100毫升胶体金溶液，首先加入0.2M的0.70毫升碳酸钾，混匀；按照每毫升胶体金溶液加入10微克的比例加入SARS-COV2-S1蛋白，混匀，静置5分钟，然后加入10％牛血清白蛋白溶液0.5克，混匀；10000rpm离心15分钟，收集沉淀，测定OD530nm的值；

每1000克胶体金溶液，首先加入0.2M碳酸钾溶液0.7毫升，混匀；按照每毫升胶体金溶液8微克的比例加入兔IgG，混匀，静置5分钟，然后加入10％牛血清白蛋白溶液0.5克，混匀，静置5分钟；10000rpm离心15分钟，收集沉淀，测定OD530nm的值；

将上两种沉淀分别使用胶体金结合物稀释液进行稀释后，使用喷涂机在玻璃纤维垫子上。

10.根据权利要求9所述的快速检测试纸的制备方法，其中喷涂中喷液量设定为0.6μl/mm，导轨速度50mm/秒，气泵控制在1.5-2psi。

11.根据权利要求1-10任一项所述的快速检测试纸或制备方法制备得到的快速检测试纸在制备新冠抗体检测试剂盒或新冠疫苗效果检测试剂盒中的应用。