[发明专利]新冠总抗体和中和抗体胶体金快速检测试纸及其制备方法

说明书

本发明提供了一种新型冠状病毒总抗体和中和抗体胶体金快速检测试纸及其制备方法和应用。本发明的试纸由固相有鼠抗人IgG/IgM抗体(检测线T1)、基因重组新型冠状病毒ACE2蛋白(检测线T2)和羊抗兔IgG抗体(质控线C)的层析膜、预先喷涂有胶体金标记基因重组新型冠状病毒刺突蛋白S1抗原和兔IgG抗体的结合垫、以及其他辅料依次粘贴制成。本发明的试纸采用抑制法和捕获法原理，用于体外定性的检测人血液样本中的新型冠状病毒总抗体和中和抗体，可以有效排除假阳性，提高检测准确度。

技术领域

本发明属于免疫化学体外检测技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒总抗体和中和抗体胶体金法快速检测试纸及其制备方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒侵入人体后，体内浆细胞会产生病毒特异性抗体，其中只有一部分是中和抗体。其中特异性IgM抗体多在发病3-5天后开始出现阳性，IgG抗体滴度恢复期交急性期有4倍及以上增高，一般发病1周内阳性率均较低。

新型冠状病毒中和抗体是由病毒最外层的包膜或衣壳抗原刺激机体产生的一类能与病毒结合并使之丧失感染力的抗体。刺突蛋白(S蛋白)是冠状病毒最重要的表面膜蛋白，决定了病毒的宿主范围和特异性，是宿主中和抗体的重要位点以及疫苗设计的关键靶点。S蛋白含有两个亚基，S1和S2。因此，针对该结构域的抗体可能对SARS-CoV-2具有高度特异性，这些抗体从而可以显示个体是否暴露于可能导致COVID-19的病毒中。

发明内容

本发明主要目的在于提供一种总抗体和中和抗体联合检测试剂盒。要解决的技术问题在于中和抗体的产生是在依赖于IgG和IgM抗体，避免由于体内存在干扰物质或样本原因，中和抗体检测可能会出现假阳性。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种通过捕获法判断样本中是否针对新型冠状病毒的IgG/IgM抗体，第二条线上采用抑制法原理进行新型冠状病毒中和抗体的检测。

一方面，本申请提供了一种新型冠状病毒总抗体和中和抗体胶体金快速检测试纸，所述试纸包含层析膜、缓冲垫、结合垫；所述层析膜上沿液体层析方向依次设有检测线T1和T2以及质控线，所述结合垫上已经预先吸附有先稀释的胶体金标记结合物，同时在层析膜和结合垫中间设有缓冲垫。

进一步地，检测线T1线为鼠抗人IgG和IgM混合包被线，T2线为基因重组新型冠状病毒的细胞表面受体ACE2包被线。

进一步地，质控线的包被物为为羊抗兔IgG抗体、羊抗鼠IgG抗体或DNP-BSA。

进一步地，缓冲垫为滤血膜或玻璃纤维。

进一步地，结合垫的一端喷涂有混合稀释的胶体金标记的基因重组新型冠状病毒刺突蛋白S1。

进一步地，结合垫的另一端喷涂有混合稀释的胶体金标记的兔Ig抗体、鼠IgG抗体或兔抗DNP抗体。

进一步地，所述层析膜制备过程中包被液浓度为：鼠抗人IgG抗体和鼠抗人IgM浓度分别为0.3-0.6mg/mL、基因重组新型冠状病毒的细胞表面受体ACE2蛋白浓度为0.8-1.2mg/mL。

进一步地，结合垫制备过程包括：

使柠檬酸和氯金酸溶于热水中制备胶体金溶液；

向胶体金溶液中加入碳酸钾、SARS-COV2-S1蛋白和牛血清白蛋白溶液，离心并收集沉淀；向胶体金溶液中加入碳酸钾、兔IgG和牛血清白蛋白溶液，离心并收集沉淀；

进一步地，结合垫制备过程包括：

量取1％柠檬酸三钠体积40毫升，2％氯金酸体积50毫升；将氯金酸加入到1000毫升纯化中，加热至沸腾，然后快速加入称取好的柠檬酸三钠，继续加热10分钟后，停止加热，待胶体金溶液冷却后，补加超纯水至1000g；