[发明专利]一种以TTC作为神经元细胞靶向基因的融合蛋白的诱导表达

权利要求书

1.一种以TTC作为神经元细胞靶向基因的融合蛋白的诱导表达，其特征在于，包括如下步骤：一、将线粒体外膜蛋白FUNDC1、破伤风杆菌重链C端无毒片段TTC和绿色荧光蛋白EGFP的碱基序列分别设计相应的引物，然后分别进行PCR扩增；二、回收步骤一的三个片段的基因后，将其与携带HIS(6×his)标签的PET-32a(+)表达载体相连接，然后转化大肠杆菌DH5α；三、通过阳性克隆筛选，抽提质粒测序；四、将测序正确的质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中大量表达纯化，得到高浓度的TTC-mFundc1-EGFP融合蛋白；利用TTC-mFundc1-EGFP融合蛋白中破伤风无毒C端片段TTC的神经侵袭性，用于靶向到神经细胞。

2.根据权利要求1所述一种以TTC作为神经元细胞靶向基因的融合蛋白的诱导表达，其特征在于，TTC-mFundc1-EGFP融合蛋白的表达量可达约5mg/mL。

3.根据权利要求1所述一种以TTC作为神经元细胞靶向基因的融合蛋白的诱导表达，其特征在于，大肠杆菌表达载体pET-32a(+)是含有抗氨苄青霉素基因的融合蛋白类型原核高效表达载体。

4.根据权利要求1或2或3所述一种以TTC作为神经元细胞靶向基因的融合蛋白的诱导表达，其特征在于，用于转化用的受体菌为E.coliDH5α或TOP10。

5.根据权利要求1或2或3所述一种以TTC作为神经元细胞靶向基因的融合蛋白的诱导表达，其特征在于，用于表达用的受体菌为E.coliBL21(DE3)或BL21(DE3)pLysS。

6.根据权利要求1或2或3所述一种以TTC作为神经元细胞靶向基因的融合蛋白的诱导表达，其特征在于，纯化方法采用Ni-镍亲和纯化柱层析方法纯化所述融合蛋白。