[发明专利]一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒和提取方法在审
| 申请号： | 202111319156.2 | 申请日： | 2021-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN114231479A | 公开（公告）日： | 2022-03-25 |
| 发明（设计）人： | 唐世磊;李航宇;张成宏;何帅 | 申请（专利权）人： | 中国医科大学附属第四医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 天津市尚仪知识产权代理事务所(普通合伙) 12217 | 代理人： | 孙乔乔 |
| 地址： | 110032 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提取 人原代 肝癌 纤维 细胞 试剂盒 方法 | ||
1.一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：包括青链霉素双抗原液、胰蛋白酶／EDTA消化液、IV型胶原酶、α-MEM培养基和胎牛血清。
2.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：所述青链霉素双抗原液的浓度为10000U／ml。
3.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：所述青链霉素双抗的使用终浓度为1%。
4.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：所述胰蛋白酶／EDTA消化液为含有0.25%胰蛋白酶、0.04%EDTA的PBS溶液，pH=7.2。
5.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：所述IV型胶原酶的使用终浓度为1mg/ml。
6.根据权利要求1所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，其特征在于：胎牛血清的使用终浓度为20%。
7.一种提取人原代肝癌成纤维细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1. 将肝癌组织放入含1%青链霉素双抗的培养基中，并用含1%青链霉素双抗的培养基洗涤组织，静置1-2min后，用含1%青链霉素双抗的培养基重复洗涤组织2-3遍；
S2. 弃去洗涤液，加入胰蛋白酶／EDTA消化液，37℃水浴中消化5-10min；
S3. 吸弃胰蛋白酶，加入含1%青链霉素双抗的培养基终止消化，并重复加入1%青链霉素双抗的培养基2-3次进行洗涤；
S4. 吸弃洗涤液，加入胶原酶，37℃水浴消化20-30min，加含1%青链霉素双抗的培养基终止消化；
S5. 3500-4000r／min离心2-3min，弃上清，用含1%青链霉素双抗的培养基洗涤胶原酶2-3遍，重复离心，弃上清；
S6.加入含20%胎牛血清、1%青链霉素双抗的α-MEM培养基，吹打均匀，在37℃、5%CO2条件下进行培养。
8.根据权利要求7所述的一种提取人原代肝癌成纤维细胞的方法，其特征在于：步骤S1中，切取1-3cm3的肝癌组织。
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