[发明专利]一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒和提取方法

说明书

本发明公开了一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒和提取方法。所述试剂盒包括青链霉素双抗原液、胰蛋白酶／EDTA消化液、IV型胶原酶、α‑MEM培养基和胎牛血清。提取人肝癌成纤维细胞的方法包括以下步骤：将肝癌组织修剪后采用1%青链霉素双抗的培养基洗涤，弃洗液后加入胰蛋白酶／EDTA消化液消化5‑10min；加培养基洗液终止消化、弃洗液后加入IV型胶原酶消化20‑30min，终止消化后离心、洗涤胶原酶；最后沉淀中加入含20%胎牛血清、1%青链霉素双抗的α‑MEM培养基，在37℃、5%CO₂条件下进行培养。本申请的试剂盒能够有效提高人原代肝癌成纤维细胞的提取成功率，节省成本并提高工作效率。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒和提取方法。

背景技术

肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤间质中最主要的细胞成分，在肿瘤的发生和发展过程中扮演着至关重要的角色。这些肿瘤相关成纤维细胞在形态、功能、蛋白质表达、对细胞因子的反应性及遗传学水平上与正常成纤维细胞存在明显差异。

肿瘤相关成纤维细胞目前是研究热点之一，该细胞与肿瘤的发生发展和转移侵袭有着密不可分的关系，以肿瘤相关成纤维细胞为靶点的药物成为提高肿瘤治愈率的一种新方法。目前，现有的肿瘤相关成纤维细胞提取方法不能获得大量的肿瘤相关成纤维细胞，提取率较低，为研究其机制及作用带来很大的影响。

发明内容

本发明为了解决上述技术问题，提供了一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒和提取方法。

本发明是通过以下技术方案得以实现的。

一种提取人原代肝癌成纤维细胞的试剂盒，包括青链霉素双抗原液、胰蛋白酶／EDTA消化液、IV型胶原酶、α-MEM培养基和胎牛血清。

进一步的，所述青链霉素双抗原液的浓度为10000U／ml。

进一步的，所述青链霉素双抗的使用终浓度为1%。

进一步的，所述胰蛋白酶／EDTA消化液为含有0.25%胰蛋白酶、0.04%EDTA的PBS溶液，pH=7.2。

进一步的，所述IV型胶原酶的使用终浓度为1mg/ml。

进一步的，胎牛血清的使用终浓度为20%。

一种提取人原代肝癌成纤维细胞的方法，包括以下步骤：

S1. 将肝癌组织放入含1%青链霉素双抗的培养基中，并用含1%青链霉素双抗的培养基洗涤组织，静置1-2min后，用含1%青链霉素双抗的培养基重复洗涤组织2-3遍；

S2. 弃去洗涤液，加入胰蛋白酶／EDTA消化液，37℃水浴中消化5-10min；

S3. 吸弃胰蛋白酶，加入含1%青链霉素双抗的培养基终止消化，并重复加入1%青链霉素双抗的培养基2-3次进行洗涤；

S4. 吸弃洗涤液，加入胶原酶，37℃水浴消化20-30min，加含1%青链霉素双抗的培养基终止消化；

S5. 3500-4000r／min离心2-3min，弃上清，用含1%青链霉素双抗的培养基洗涤胶原酶2-3遍，重复离心，弃上清；

S6.加入含20%胎牛血清、1%青链霉素双抗的α-MEM培养基，吹打均匀，在37℃、5%CO₂条件下进行培养。

进一步的，步骤S1中，切取1-3cm³的肝癌组织。

本申请具有以下有益效果。

本申请的试剂盒能够有效提高人肝癌成纤维细胞的原代提取成功率，节省成本并提高工作效率。本申请肝癌成纤维细胞提取方法操作简单，实用性强，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1是本发明培养得到的人肝癌成纤维细胞图。