[发明专利]施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶及其应用

权利要求书

1.一种施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一种编码如权利要求1所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶的多核苷酸。

3.一种如权利要求1所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶的应用，其特征在于，所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶作为基因编辑或基因修饰工具的应用。

4.根据权利要求3所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶的应用，其特征在于，所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶作为RNA指导的DNA剪切工具的应用，或，

所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶作为DNA指导的RNA剪切工具的应用；

所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶作为RNA指导的DNA剪切工具时，或，所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶作为DNA指导的RNA剪切工具时，

引导PsPIWI-RE发挥剪切活性的guide长度范围为10-30nt。

5.根据权利要求4所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶的应用，其特征在于，

5’OH-RNA,5’P-RNA引导所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶对配对ssDNA的特异性剪切，21nt 5’P-RNA的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，21nt5’OH-RNA的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；

5’OH-DNA,5’P-DNA引导所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶对配对ssRNA的特异性剪切，21nt 5’P-DNA的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，21nt5’OH-DNA的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

6.根据权利要求4所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶的应用，其特征在于，所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶作为基因编辑或基因修饰工具的应用条件选择以下条件中的一种或两种：

所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶作为基因编辑或基因修饰工具的应用条件为20-65℃范围内，优选为55℃；

所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶作为基因编辑或基因修饰工具的应用条件为：在含有Mg²⁺和Mn²⁺的条件下使用。

7.一种包含编码权利要求1所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶的多核苷酸的表达载体。

8.一种包含权利要求7所述表达载体的病毒载体。

9.一种多酶体系或试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶，同时还包括DinG解旋酶，所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶通过与DinG解旋酶共同作用实现双链DNA的剪切。

10.一种多酶体系或试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶，同时还包括短核酸链guide；

所述短核酸链guide选择为5’OH-RNA或5’P-RNA时，所述短核酸链guide引导所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶对配对ssDNA的特异性剪切；

所述短核酸链guide选择为5’OH-DNA或5’P-DNA时，所述短核酸链guide所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE核酸酶对配对ssRNA的特异性剪切。