[发明专利]甲胎蛋白抗体包被磁珠的方法、偶联磁珠及试剂盒

说明书

本发明涉及甲胎蛋白抗体包被磁珠的方法、偶联磁珠及试剂盒，是在甲胎蛋白抗体中加入预处理液进行预处理，之后将经过预处理的甲胎蛋白抗体与羧基磁珠偶联，得到甲胎蛋白抗体偶联磁珠，其中预处理液包括十二烷基硫酸钠溶液。在甲胎蛋白抗体与羧基磁珠进行偶联前，通过十二烷基硫酸钠对甲胎蛋白抗体进行预处理，可以明显提高甲胎蛋白抗体与磁珠的偶联效率，提高现有技术中利用化学发光磁微粒免疫分析法检测人血清中甲胎蛋白的灵敏度和信噪比。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及甲胎蛋白抗体包被磁珠的方法、偶联磁珠及试剂盒。

背景技术

甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)是一种属于白蛋白家族的糖蛋白，主要由胎儿肝细胞及卵黄囊合成，其分子量为70000道尔顿。甲胎蛋白在胎儿血液循环中具有较高浓度，出生后则下降，出生后2-3月甲胎蛋白被白细胞替代，故在成人血清中含量极低，较难检出。

AFP具有重要的生理功能，包括运输功能、生长因子调节功能、T淋巴细胞诱导凋亡和免疫抑制等。AFP与慢性病毒性肝炎、肝硬化及多种肿瘤的发生发展密切相关，在多种肿瘤中均可表现出高浓度，可作为多种肿瘤的阳性检测指标。目前临床上主要用于原发性肝癌的辅助诊断，AFP也可与人体绒毛膜促性腺激素联合检测，用于非精原细胞型睾丸癌患者的病情监测。

检测甲胎蛋白的常规方法是酶联免疫吸附法，但该方法存在大量不足，例如操作繁琐、检测灵敏度低、检测线性范围窄和重现性差等。近年来，具有高灵敏度、检测范围宽和操作简便等优点的化学发光免疫分析法，逐渐成为了最理想的检测方法。如公开号为CN112763719A的专利申请中，公开了一种用核酸适配体磁珠检测甲胎蛋白的方法，将甲胎蛋白核酸适配体与磁珠混合，之后分离磁珠进行检测，虽然操作简便，但甲胎蛋白抗体与磁珠的偶联效率低，会造成检测不灵敏，信噪比不足的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种甲胎蛋白抗体包被磁珠的方法、偶联磁珠及试剂盒，利用十二烷基硫酸钠对甲胎蛋白抗体进行预处理，从而改善甲胎蛋白抗体与磁珠的偶联效率，最终提高现有技术中利用化学发光磁微粒免疫分析法检测人血清中甲胎蛋白灵敏度和信噪比不足的技术问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种甲胎蛋白抗体包被磁珠的方法，在甲胎蛋白抗体中加入预处理液进行预处理，之后将经过预处理的甲胎蛋白抗体与羧基磁珠偶联，得到甲胎蛋白抗体偶联磁珠，其中预处理液包括十二烷基硫酸钠溶液。

进一步优选，十二烷基硫酸钠溶液的浓度为0.2～0.3％，预处理时间为5～10min，预处理温度为20～25℃。

进一步优选，十二烷基硫酸钠溶液的浓度为0.2％、预处理时间为10min，预处理温度为25℃。

进一步优选，所述预处理液还包括浓度为10mM～80mM的MES缓冲液。

进一步优选，羧基磁珠在于甲胎蛋白抗体偶联前，与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的混合液进行混合活化，其中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的浓度均为8～12mg/ml；活化温度为23～28℃，活化时间为10～20min。

进一步优选，将经过活化的羧基磁珠在MES缓冲液中洗涤2～3次，其中MES缓冲液的浓度为10mM～80mM，pH为5.5～7.5，之后将经过预处理的甲胎蛋白抗体和经过洗涤的羧基磁珠进行混合偶联的温度为22～28℃，混合偶联时间为1～5h。

进一步优选，将经过偶联的磁珠放入含有0.1％BSA的MES缓冲液中封闭处理，其中密封时间为5～8h，密封温度为22～28℃，之后将经过密封处理的偶联磁珠加入到Tris缓冲液重悬保存，保存温度为2～8℃。

进一步优选，所述甲胎蛋白抗体包被每毫克磁珠的量为10～30μg。