[发明专利]一种多功能牡蛎活性多肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种多功能牡蛎活性多肽及其制备方法和应用，将新鲜牡蛎全脏器清洗，沥干，高速组织捣碎匀浆，加入去离子水，调pH值为6.5‑7.5，温水浴20‑60 min后，分别加复合蛋白酶，酶解3‑6 h，酶解结束后100℃灭酶10 min，采用梯度离心后取上清液，冷藏温度条件下，通过不同截留分子量的超滤膜进行分离，得到分子量小于3000 Da的酶解液，经浓缩、冷冻干燥，得到多功能牡蛎活性多肽。本发明的多功能牡蛎活性多肽应用到软组织修复药物中，其效果明显优于现有技术的药物，具有抗氧化、促凝血及细胞增殖的功能，且组织缺损修复快，抑制疤痕形成，促缺损皮肤组织重塑再生效果优异。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种多功能牡蛎活性多肽及其制备方法和在软组织修复药物中的应用。

背景技术

太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）是我国南海海域主要养殖品种，肉质鲜美，营养丰富全面，素有“海洋牛奶”之称。牡蛎是第一批入选食药同源的食物，国内外学者研究发现牡蛎多肽具有抗氧化、免疫、抗肿瘤、抑菌、改善记忆、解酒护肝等功能活性，这为促进缺损皮肤组织重塑再生奠定了理论基础，但尚未有对其进行深入药用价值的相关报道。因此，充分开发利用牡蛎功能价值的研究是非常必要的。

软组织具有生物和细胞的多层结构，是保护人体免受外界伤害和病原微生物侵害的重要屏障。缺损软组织重塑再生即皮肤伤口愈合由四个连续和重叠的过程引起：止血、炎症、增殖和重塑再生。虽然皮肤是可再生的，但很少发生完美的恢复。尤其是当皮肤愈合中断时，常伴有永久性疤痕，其发病率可能会增加，从而显着降低生活质量。目前，常用的创伤修复药物主要有：基因工程细胞因子、抗菌药物、酶清创制剂、中药制剂，抗氧化剂和皮质类固醇等。

医用敷料已被广泛用于促进各种创伤类型的愈合，然而，针对皮肤外伤的天然无瘢痕制剂及创伤患者专用型临床营养品却非常缺乏，急需开发有助于伤口愈合的天然活性物质，研制方便高效的促愈产品。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种多功能牡蛎活性多肽及其制备方法和在软组织修复药物中的应用。本发明的多功能牡蛎活性多肽相比于现有技术的药物，具有抗氧化、促凝血及细胞增殖的功能，组织缺损修复快，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节生长因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促软组织修复效果明显。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种多功能牡蛎活性多肽的制备方法包括以下步骤：

将新鲜牡蛎全脏器清洗，沥干，高速组织捣碎匀浆，加入去离子水，调pH值为6.5-7.5，温水浴20-60 min后，分别加 1000 U/g蛋白的复合蛋白酶，酶解3-6 h，酶解结束后，100 ℃ 灭酶10 min。采用梯度离心后取上清液，冷藏温度条件下，通过不同截留分子量的超滤膜进行分离，得到分子量小于3000 Da的酶解液，浓缩，-80 ℃ 保存24 h，冷冻干燥，得到多功能牡蛎活性多肽（即为CAPs）。

优选地，多功能牡蛎活性多肽的制备方法所述的温水浴的温度为45-65 ℃。

优选地，多功能牡蛎活性多肽的制备方法所述的复合蛋白酶为庞博动物蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶中的一种或几种。

优选地，多功能牡蛎活性多肽的制备方法所述的梯度离心的具体过程为3000 r/min转速离心5 min，然后5000 r/min转速离心5 min，最后8000r/min转速离心20 min。

优选地，多功能牡蛎活性多肽的制备方法所述的冷藏温度的温度为2-8 ℃。

本发明提供的多功能牡蛎活性多肽的制备方法，是通过温水浴的方式，使水溶性蛋白质能较全面的从细胞壁中溶出，弱化组织大分子相互作用结构，并且提前达到蛋白酶最佳作用温度，有利于对蛋白质的充分酶解。通过对酶解液采取梯度离心的方法，有利于不同颗粒的逐步离心沉淀，有利于多肽的获得，与现有技术相比，能获得具有多功能的活性多肽。