[发明专利]一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系及其应用

权利要求书

1.一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系，其特征在于，由含有mTetR修饰的Tb供体Tb-mTetR和tetO修饰QD受体QD-tetO组成。

2.根据权利要求1所述的一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系，其特征在于，所述tetO的碱基序列为：

tetO-F 5'-GTTATTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAA-3'，如SEQ ID NO.1所示，

tetO-R 5'-TCTATCACTGATAGGGAGTGGTAAAATAACTTTTTTTTTTT-biotin-3'，如SEQ IDNO.2所示。

3.根据权利要求1所述的一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系，其特征在于，所述QD-tetO为QD和tetO在缓冲液中混匀后，经反应、洗涤、溶解获得的。

4.根据权利要求1所述的一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系，其特征在于，所述mTetR为根据mTetR氨基酸序列进行大肠杆菌密码子偏好性优化得到的，所述mTetR碱基序列为：

ATGTCTCGTCTGGACAAAAGCAAAGTTATCAACTCCGCACTGGAACTGCTGAACGAAGTTGGTATCGAGGGTCTGACGACCCGTAAACTGGCACAGAAACTGGGCGTTGAACAGCCTACTCTGTACTGGCATGTTAAAAACAAACGTGCACTGCTGGATGCGCTGGCTGTCGAAATTCTGGCTCGTCACCATGATTACAGCCTGCCTGCTGCGGGCGAATCTTGGCAGAGCTTCCTGCGTAACAATGCAATGTCCTTCCGTCGCGCTCTGCTGCGTTACCGTGACGAAGCGAAAGTACATCTGGGCACCCGCCCGGATGAAAAACAGTATGACACCGTCGAAACCCAGCTGCGTTTTATGACCGAAAACGGTTTCTCCCTGCGTGACGGTCTGTACGCAATCTCTGCGGTTAGCCATTTCACCCTGGGCGCTGTACTGGAACAGCAAGAACACACCGCGGCACTGACTGATCGTCCGGCGGCGCCGGACGAAAACCTGCCGCCGCTGCTGCGCGAAGCACTGCAGATCATGGACAGCGATGACGGCGAGCAGGCGTTCCTGCACGGTCTGGAGTCCCTGATCCGTGGCTTCGAAGTGCAGCTGACTGCTCTGTCTCAGATCGTG，如SEQ ID NO.3所示。

5.根据权利要求1所述的一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系，其特征在于，所述mTetR扩增引物序列为：

BamHI-mTetR-F：5'-CGGGATCCGATGTCTCGTCTGGACAAAAGC-3'，如SEQ ID NO.4所示，

XhoI-mTetR-R：5'-CCGCTCGAGCACGATCTGAGACAGAGCAGTC-3'，如SEQ ID NO.5所示,

其中：BamHI-mTetR-F下划线显示的部分为BamHI酶切识别序列；XhoI-mTetR-R下划线显示的部分为XhoI酶切识别序列。

6.根据权利要求1所述的一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系，其特征在于，所述Tb-mTetR为Tb-NHS与mTetR混匀后，经反应、纯化、洗涤、透析得到的。