[发明专利]一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系及其应用

说明书

本发明公布了一种用于检测食品样本多西环素turn‑on型均相能量共振转移检测体系及其在乳制品检测中的应用。本发明均相FRET体系包括mTetR修饰的Tb供体（Tb‑mTetR）和tetO修饰QD受体（QD‑tetO），多西环素存在时，mTetR的构像发生改变致使其与tetO亲和力提高进而发生结合，使得Tb供体和QD受体距离缩短，在337.1 nm激发光照射下发生FRET效应，进行时间分辨荧光检测可有效避免背景荧光信号的干扰，极大提高信噪比。本发明用于牛奶多西环素的检测的灵敏度高（检测限0.56μg/L，定量限1.24μg/L），准确度高（添加回收率74.6～100.7%），稳定性好（变异系数11%），且均相反应效率高。

技术领域

本发明涉及食品安全检测领域，具体涉及将一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系及其在乳制品样本中的应用。

背景技术

四环素类抗生素（Tetracyclines,Tc）是一类广谱抗生素，可特异性地与细菌核糖体30S亚基的A位点结合，阻止氨基酰-tRNA进入A位，从而通过抑制细菌蛋白质的合成来发挥抑菌/杀菌作用。除常见的革兰阳性菌、革兰阴性菌以及厌氧菌外，多数立克次氏体属、支原体属、衣原体属、非典型分枝杆菌属、螺旋体也对四环素类药物敏感。因此，四环素类药物是医学临床、宠物医疗以及农牧业领域使用最广泛使用的抗生素之一。在畜禽养殖领域，四环素类抗生素也用于动物疾病的预防和治疗，促进动物生长，提高饲料转化率，产生了巨大的经济效益。然而，此类药物的大量且不规范使用，导致了畜禽产品中药物残留及细菌耐药性的产生，对人乃至动物的生命健康构成了威胁。我国于2019年修订并发布了食品安全国家标准GB 31650《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》，其中涵盖了四环素类药物的最高残留限量。其中，多西环素是牛/羊产奶期和家禽产蛋期的禁用药物；由于四环素类药物化学结构上的相似性，常规的免疫学检测方法难以有效地将多西环素与其它四环素类药物区分开来，对四环素类药物的免疫学快速检测造成了较大的困扰。

荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer,FRET）是指一个荧光基团（Donor，供体）的发射光谱与另一个基团（Acceptor，受体）的吸收光谱具有有效重叠，并且两个分子的距离在10 nm范围以内时发生的一种非辐射能量转移过程。为解决四环素残留免疫速测中存在的难题，本发明提供了一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系，并将其应用乳制品中多西环素的检测。

发明内容

为了提供了一种快速、简单、高灵敏的多西环素特异性的检测方法，具体构建了一种基于FRET的turn-on型多西环素特异性均相检测体系，方法的检测灵敏度更高，可在较大程度上消除背景信号的干扰，提高信噪比，在实际应用中不受温湿度影响，操作简便。

本发明使用以下缩写来代表特定的专业术语（表1），以便于理解和缩短篇幅：