[发明专利]检测ADRB1基因G1165C多态性的引物、试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测ADRB1基因G1165C多态性的分型探针引物，其特征在于，野生型探针引物为： ADRB1-Wt：VIC-AAGGCCTTCCAGGgACTC-Bhq1，突变型探针引物为：ADRB1-Mut：FAM-AAGGCCTTCCAGCgACTC-Bhq1，其中所述大写碱基为DNA碱基，所述小写碱基为RNA碱基。

2.一种用于检测ADRB1基因G1165C多态性的试剂盒，其特征在于包括引物，所述引物为权利要求1所述的野生型探针引物、突变型探针引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的通用引物。

3.依据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括10×PCR检测反应液、酶混合液、阳性对照品和阴性对照品。

4.依据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述10×PCR检测反应液包括pH值为8.5的200mmol/L的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液、浓度为20mmol/L的硫酸镁溶液、浓度为500mmol/L的氯化钾溶液和体积比为0.2％的甘油溶液；所述酶混合液包括1U/μL～5U/μL的耐热DNA聚合酶和0.05U/μL～0.2U/μL RNase H2酶；所述引物浓度为0.2～1.0uM； 所述阳性对照品为野生基因型ADRB1-Wt质粒和/或突变型ADRB1-Mut质粒，所述质粒浓度为1000copys/ul；所述阴性对照品为灭菌水。

5.一种ADRB1基因G1165C多态性非疾病诊断治疗目的的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取权利要求3所述的试剂盒，配置预混液PCR-mix；

（2）提取样本DNA，进行DNA浓度测定并稀释至10ng/μL，备用；

（3）根据所述样本、阴性对照、阳性对照的数量向相应数量的反应管中加入18μL的PCR-mix，并取步骤（2）备用的样本DNA、阴性对照、阳性对照各2μL加入到上述PCR-mix中，盖好管盖，形成待测样品；

（4）将待测样品放置在荧光定量PCR扩增仪上进行测试。

6.依据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，所述预混液PCR-mix组分为：10×PCR检测反应液2μL、MgCl2 1.6μL、dNTP 1.6μL、野生型探针引物0.4μL、突变型探针引物0.4μL、通用引物0.6μL、Taq酶0.2μL、RNase H2酶0.2μL、灭菌水11μL。

7.依据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，在所述步骤（4）中，所述荧光定量PCR反应条件为：95℃预变性5min，循环数1；95℃变性20s，60℃退火35s，72℃延伸20s，循环数40。