[发明专利]检测ADRB1基因G1165C多态性的引物、试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明公开了一种检测ADRB1基因G1165C多态性的引物、试剂盒及其检测方法和应用。本发明设计一种用于检测ADRB1基因G1165C多态性的分型探针引物，其序列结构为：A‑DDDDDDDDDDDDDDDDDDD

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种检测ADRB1基因G1165C多态性的引物、试剂盒及其检测方法和应用。

背景技术

高血压作为一种慢性非传染性疾病，是我国患病率较高、致残率较高及疾病负担较重的慢性疾病。与发达国家相比，我国高血压患病人数多，虽然近年来高血压的知晓率、治疗率及控制率有所提高，但仍处于较低水平，高血压控制率地区差异较大，为我国慢性病的预防和控制带来极大挑战。

目前临床对于高血压的控制方法主要是改变饮食习惯和生活方式等非药物措施和药物治疗两方面。其中，药物治疗是控制血压最有效的措施。治疗高血压的药物品种繁多，而且抗高血压药需长期服用，在实际治疗过程中，不同个体对于药物反应的差异性很大，影响因素包括年龄、并发症、营养状况、遗传背景、药物相互作用及环境等，其中遗传背景的影响尤为重要。药物进入人体内，经过吸收、转运、代谢、效应及清除的过程发挥作用，携带不同基因型的患者在上述药物作用过程中可能呈现反应的程度不同，表现为药物反应性的个体差异。通过检测药物代谢酶和药物靶点基因，可指导临床医生针对特定患者选择合适的降压药物和给药剂量，提高降压药物治疗的有效性和安全性。

鉴于此，多数患者都会经历“试药”过程，包括试品种、试剂量、试给药频次、试服药时间等，直至各项生理指标达标。而这种“试药”的模式，对高血压患者来讲无疑是痛苦的，还会造成资源和时间的浪费，以及难以预知的药物不良反应。

肾上腺素受体(β-adrenergic receptor)为肾上腺素受体的一个亚家族，属于G蛋白偶联受体超家族，包含β1、β2和β3三种不同亚型。该类受体通过与Gs蛋白偶联调节细胞内cAMP和L型Ca²⁺通道的开放频率，是β受体激动剂和β受体阻滞剂的作用靶点。β1受体编码基因ADRB1多态性可影响β受体阻断剂如美托洛尔的疗效。

目前用于ADRB1基因多态性(G1165C)的方法主要有直接测序法、ARMS PCR法、基因芯片和液相芯片法。直接测序的法结果较为准确，但其操作流程较复杂，耗时较长，成本较高。ARMS PCR法采用了相对Ct差的方法进行判定基因型，无法通过一管进行基因型的区分。基因芯片法及液相芯片法同样操作过程复杂，检测成本高，检测周期较长。

因此，研发一种快速、准确且低成本的新型检测方法成为了高血压临床治疗药物开发和药物使用管理的迫切需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测ADRB1基因G1165C多态性的引物、试剂盒及其检测方法和应用。

为解决上述技术问题，本发明的发明构思如下：

鉴于ADRB1 Gly389Arg(rs1801253)多态性导致产生位点Arg389和Gly389两种类型的受体，其中Arg389型受体与G蛋白偶联效率高于Gly389型受体。长期研究发现Arg389纯合子高血压患者应用美托洛尔后血压下降的程度是Gly389Arg杂合子基因型个体的3倍；Arg389纯合子基因型心衰患者应用卡维地洛和美托洛尔治疗后左室射血分数改善情况更佳。若在应用β1受体阻滞药前进行ADRB1多态性检测，并根据其基因型调整用药剂量，可以提高疗效，减少不良反应的发生。

为解决ADRB1基因多态性(G1165C)的方法现有技术的弊端，本发明的方法采用rhAmp SNP分型技术，并在此基础上进行了改进，它基于RNase H2依赖性PCR(rhPCR)，可为SNP分析提供高信号和特异性。rhAmp SNP基因分型将独特的两种酶系统与3'末端封闭的DNA-RNA杂交引物结合在一起，以检测SNP位点。

本发明具体采用如下技术方案：