[发明专利]头颈鳞癌治疗分子探针及应用

说明书

本发明提供头颈鳞癌治疗分子探针及应用，涉及头颈鳞癌治疗技术领域。该头颈鳞癌治疗分子探针，硒化合物对头颈鳞癌细胞基因组稳定性的影响进行研究：首先研究硒化合物激活ATR通路的作用；其次硒化合物对TCAB1转录失活的作用分析；再研究ATR通路和TCAB1通路的相互作用；最后分析硒化合物作用下头颈鳞癌细胞的基因组稳定性干预治疗的可行性；研究时所述肿瘤细胞基因组包括两种人口腔鳞癌细胞系(HSC‑3、Cal‑27)、鼻咽癌细胞系CNE1和腺样囊性癌细胞系ACC2，所述硒化合物的作用试剂为亚硒酸钠与硒代‑L‑蛋氨酸。本发明针对硒抗癌这一研究热点，通过分析硒化合物作用下ATR通路与端粒酶TCAB1相互调控的节点及机制，力求达到精准靶向治疗，则可能获得较显著的抑癌效果。

技术领域

本发明涉及头颈鳞癌治疗技术领域，具体为头颈鳞癌治疗分子探针及应用。

背景技术

头颈部恶性肿瘤的发病率居全身恶性肿瘤第6位，其中90％以上为鳞状细胞癌，尽管在过去的20年间治疗方法不断改进，但其五年生存率仍在50％左右，目前临床上针对头颈鳞癌高复发率、高转移率及放化疗抵抗尚无有效措施。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了头颈鳞癌治疗分子探针及应用，解决了临床上针对头颈鳞癌高复发率、高转移率及放化疗抵抗尚无有效措施的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：头颈鳞癌治疗分子探针及应用，硒化合物对头颈鳞癌细胞基因组稳定性的影响进行研究：

步骤一.研究硒化合物激活ATR通路的作用；

步骤二.硒化合物对TCAB1转录失活的作用分析；

步骤三.研究ATR通路和TCAB1通路的相互作用；

步骤四.分析硒化合物作用下头颈鳞癌细胞的基因组稳定性干预治疗的可行性；

研究时所述肿瘤细胞基因组包括两种人口腔鳞癌细胞系(HSC-3、Cal-27)、鼻咽癌细胞系CNE1和腺样囊性癌细胞系ACC2，所述硒化合物的作用试剂为亚硒酸钠与硒代-L-蛋氨酸。

优选的，所述步骤一中的具体研究方法如下：

a.系统分析ATR通路信号传导在硒化合物处理头颈鳞癌细胞中的分子表达：利用免疫荧光和免疫印迹检测ATRIP，TopBP1，9-1-1和Mre11-Rad50-Nbs1复合体，H2AX，CTIP和PCNA信号分子灶点形成的能力；

b.单链DNA中间体的形成：利用磷酸化RPA和非变性BrdU免疫荧光手段，检测硒化合物处理头颈鳞癌细胞中单链DNA(ssDNA)的形成能力；

c.DNA复制叉的稳定性：BrdU和IdU交互标记细胞，观察紫外线或喜树碱处理头颈鳞癌细胞细胞后IdU单色荧光标记区域的长度，以指示复制叉重启和延伸的能力；

d.硒化合物作用蛋白的筛选：构建腺病毒载体，表达带有TAP标签的硒化合物相关蛋白,制备高滴度腺病毒载体并感染头颈鳞癌细胞(108细胞数)，提取总蛋白或核蛋白，利用共价结合兔IgG的磁珠(Dynal beads)特异吸附硒化合物TAP及相互作用蛋白质复合体，经SDS-PAGE电泳分离选切特异蛋白条带后MALDI-TOF或液相色谱关联的质谱分析，鉴定多肽指纹，筛选与ATR通路相关的靶蛋白。

优选的，所述步骤二中的具体研究方法如下：