[发明专利]一种快速分离纯化光合细菌的方法

说明书

本发明公开了一种快速分离纯化光合细菌的方法，具体为：将从自然界采集的样品用无菌水稀释、混匀后取少量划线接种于分离培养基上，之后于黑暗环境以及有氧条件下培养至出现单菌落；将单菌落接种于液体培养基中密封培养一段时间后根据液体培养基的颜色判定是否获得光合细菌，当培养基呈现黄、橙、红或粉色时表明获得光合细菌；否则再次进行分离纯化过程至获得光合细菌。本发明能够在很短的时间内获得光合细菌，与常规的光合细菌分离纯化方法相比极大的缩短了分离时间；另外整个分离过程无需借助厌氧设备、设施，投入小；在充分保证分离结果的准确性的基础上，整个分离过程不涉及复杂的操作步骤，具备较高的稳定性和可重复性。

技术领域：

本发明涉及微生物分离纯化技术领域，特别是涉及一种快速分离纯化光合细菌的方法。

背景技术：

光合细菌是一类能利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。自然环境下，光合细菌广泛分布于土壤、水田、沼泽、湖泊、江海等环境中，可通过厌氧富集方式获得具有光合细菌的混合菌液。现有的光合细菌纯化方法，如半固体试管法、Hungate滚管法、双层平板法等，存在操作方法相对复杂、实验重复性差、耗时长等缺陷；而通过厌氧设备培养厌氧菌，投入成本相对较大且光合细菌生长缓慢，尤其是在厌氧平板上的生长更加缓慢，通过厌氧技术分离光合细菌耗时过长，极大的限制了光合细菌的分离纯化效率。

发明内容：

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种快速分离纯化光合细菌的方法，可快速、准确地获得光合细菌。

本发明提供的光合细菌的快速分离纯化方法具体包括如下步骤：

1)从自然界采集样品；

2)将样品用无菌水稀释、混匀后取少量划线接种于分离培养基上；

3)将分离培养基置于黑暗环境中，在有氧条件下培养至出现单菌落；

4)挑取单菌落接种于液体培养基中密封培养一段时间；

5)根据液体培养基的颜色判定是否获得光合细菌，当培养基呈现黄、橙、红或粉色时表明获得光合细菌；否则重复所述步骤1)～步骤5)的分离纯化过程，直至获得光合细菌。

进一步地，当通过所述步骤5)获得光合细菌后，继续执行步骤6)：从所述步骤5)获得的光合细菌的液体培养基中取菌样于平板上反复划线培养，直至获得光合细菌纯菌株。

进一步地，所述步骤3)中的黑暗有氧培养温度为25～35℃，培养时间为1～3天；所述步骤4)的培养条件为：温度25～35℃，光照强度2000～5000Lx，培养时间3～7天。

进一步地，所述步骤2)中的分离培养基的组分配比为：NaHCO₃ 1～1.25g、氯化铵1～3g、K₂HPO₄ 0.1～1g、酵母粉0.05～0.2g、琼脂粉15～25g、海水1000mL；所述步骤4)中的液体培养基的组分配比为：NaHCO₃ 1～1.25g、氯化铵1～3g、K₂HPO₄ 0.1～1g、酵母粉0.05～0.2g、海水1000mL。

进一步地，所述步骤6)中用于划线培养的平板的组分配比为：NaHCO₃ 1～1.25g、氯化铵1～3g、K₂HPO₄ 0.1～1g、酵母粉0.05～0.2g、琼脂粉15～25g、海水1000mL；相应的培养条件为：黑暗有氧培养，培养温度为25～35℃。

进一步地，所述步骤2)中的划线接种方法采用四区划线法。

本发明的有益效果在于：

1)分离效率高：能够在很短的时间内获得光合细菌，与常规的光合细菌分离纯化方法相比极大的缩短了分离时间；