[发明专利]建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法

权利要求书

1.建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，所述动物模型建立方法是先行拔牙术，一周后进行放射，放射结束后第7、14、21、28、35d进行下颌骨Micro-CT扫描、组织病理学观察以确定构建放射性颌骨骨坏死模型。

2.如权利要求1所述的建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，所述动物模型建立方法包括如下步骤：

(1)给大鼠在准备放射侧行拔牙术；

(2)拔牙术后大鼠适应性饲养1周，麻醉大鼠以做放射准备，用生物学辐照器的模拟定位仪定位放射范围；

(3)定位后，使用直线加速器进行放射，按照剂量分组进行放射，左侧为放射侧；

(4)放射后每周观察局部及全身情况，处死后行Micro-CT扫描检测，取其下颌骨进行免疫组化染色；

(5)处死大鼠后利用Micro-CT层距进行逐层扫描，以观察颌骨异常部位；

(6)取扫描后的大鼠左侧下颌骨，生理盐水冲洗后置于多聚甲醛液室温下固定24h-96h，流动水冲洗过夜后置于的EDTA脱钙液中，经脱钙、包埋、连续切片后行苏木精-伊红染色和Masson三色染色，显微镜下观察其纤维化及骨破坏程度，以此来评估下颌骨骨组织及细胞的损伤情况；

(7)每七天通过取材组织皮质骨的病理学观察一次，至放射后第28天处死的大鼠骨髓腔失去原有形态，被大量增生的纤维组织充填。

3.如权利要求2所述的建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，所述直线加速器的放射线为X线，能量6mV，以放射总剂量70Gy作为标准进行等效计算，得到7Gy/次剂量并进行5次放射，隔日1次。

4.如权利要求2所述的建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，所述处死大鼠后利用Micro-CT，选择视野范围40*60mm、电压80kv、电流500μA、19.54μm分辨率、19.54μm层距进行逐层扫描，以观察颌骨异常部位。

5.如权利要求2所述的建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，所述步骤(6)生理盐水冲洗后置于4％多聚甲醛液室温下固定48h，流动水冲洗过夜后置于10％的EDTA脱钙液中，经脱钙、包埋、连续切片后行苏木精-伊红染色和Masson三色染色，显微镜下观察其纤维化及骨破坏程度，每个样本在20倍镜下选择6张照片，由3个观察者进行空白骨陷窝及骨陷窝内骨细胞计数，以此来评估下颌骨骨组织及细胞的损伤情况。

6.如权利要求2所述的建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，所述所述放射组大鼠在放射后第7d逐渐出现体重减轻、口内黏膜溃烂、放射区脱毛、咬合紊乱、颊部瘘道溢浓等临床症状，14d后放射区黏膜溃烂等症状减轻，脱毛区开始有新的毛发长出，放射组大鼠在整个实验过程中精神状态尚可，存活率达100％。

7.如权利要求2所述的建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，所述步骤(2)放射位置为前界臼齿前缘、后界下颌骨升支后缘、上界下颌骨牙槽嵴、下界为下颌骨下缘。

8.如权利要求2所述的建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，放射结束后每次饲喂同步服用黄烷-3-醇。