[发明专利]建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法

说明书

本发明提供了建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，其特征在于，所述动物模型建立方法是先行拔牙术，一周后进行放射，放射结束后第7、14、21、28、35d进行下颌骨Micro‑CT扫描、组织病理学观察以确定构建放射性颌骨骨坏死模型。本发明提供的建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，采用基础研究应用广泛的SD大鼠使得实验成本较低、易于操作且对放射敏感，成模率高、死亡率低、建模时间短、效率高的ORNJ建模条件。

技术领域

本发明属于医学动物模型领域，具体发明涉及建立颌骨骨坏死动物模型的方法。

背景技术

放射治疗是临床治疗头颈恶性肿瘤的重要方案，可大大提高肿瘤的治疗效果。但与辐射治疗有关的并发症却严重影响到病人的生活水平和后期恢复。放射性颌骨骨坏死(osteoradionecrosis of jaws，ORNJ)是最为严重并发症之一,至今颌骨放射性骨坏死的发病机制尚不完全清楚。理想的ORNJ动物模型，对于研究其发病机制、预防措施及治疗方案均具有重要意义。近年来，关于ORNJ动物模型构建研究出现不同方法，国内外尚缺乏一种理想高效的ORNJ动物模型。

发明内容

本发明针对现有技术不同动物、放射部位和放射剂量对模型建立的效果区别较大，现有技术中存在成模率低、死亡率高、效率低、周期长等问题，提供了一种建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，通过创造性设立建模条件，在多种建模条件并对比建模效果择优选出一种成模率高、死亡率低、建模时间短、效率高的ORNJ建模条件。

具体的，本发明提供了一种建立放射性颌骨骨坏死动物模型的方法，所述动物模型建立方法是先行拔牙术，一周后进行放射，放射结束后第7、14、21、28、35d进行下颌骨Micro-CT扫描、组织病理学观察以确定构建放射性颌骨骨坏死模型。

更加优选的，本发明所述动物模型建立方法包括如下步骤：

(1)给大鼠在准备放射侧行拔牙术。

(2)拔牙术后大鼠适应性饲养1周，麻醉大鼠以做放射准备，用生物学辐照器的模拟定位仪定位放射范围。

(3)定位后，使用直线加速器进行放射，按照剂量分组进行放射，左侧为放射侧。

(4)放射后每周观察局部及全身情况，处死后行Micro-CT扫描检测，取其下颌骨进行免疫组化染色。

(5)处死大鼠后利用Micro-CT层距进行逐层扫描，以观察颌骨异常部位。

(6)取扫描后的大鼠左侧下颌骨，生理盐水冲洗后置于多聚甲醛液室温下固定24h-96h，流动水冲洗过夜后置于的EDTA脱钙液中，经脱钙、包埋、连续切片后行苏木精-伊红染色和Masson三色染色，显微镜下观察其纤维化及骨破坏程度，以此来评估下颌骨骨组织及细胞的损伤情况。

(7)每七天通过取材组织皮质骨的病理学观察一次，至放射后第28天处死的大鼠骨髓腔失去原有形态，被大量增生的纤维组织充填。

具体地说，本发明所述直线加速器的放射线为X线，能量6mV，以放射总剂量70Gy作为标准进行等效计算，得到7Gy/次剂量并进行5次放射，隔日1次。

本发明所述处死大鼠后利用Micro-CT，选择视野范围40*60mm、电压80kv、电流500μA、19.54μm分辨率、19.54μm层距进行逐层扫描，以观察颌骨异常部位。

本发明所述步骤(6)生理盐水冲洗后置于4％多聚甲醛液室温下固定48h，流动水冲洗过夜后置于10％的EDTA脱钙液中，经脱钙、包埋、连续切片后行苏木精-伊红染色和Masson三色染色，显微镜下观察其纤维化及骨破坏程度，每个样本在20倍镜下选择6张照片，由3个观察者进行空白骨陷窝及骨陷窝内骨细胞计数，以此来评估下颌骨骨组织及细胞的损伤情况。