[发明专利]猪潜能扩展干细胞培养基及其培育方法在审
| 申请号： | 202111336606.9 | 申请日： | 2021-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN116121177A | 公开（公告）日： | 2023-05-16 |
| 发明（设计）人： | 梁浩;葛良鹏;丁玉春;孙静 | 申请（专利权）人： | 重庆市畜牧科学院 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735 |
| 代理公司： | 重庆弘旭专利代理有限责任公司 50209 | 代理人： | 张建 |
| 地址： | 402460 重庆*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 潜能 扩展 干细胞 培养基 及其 培育 方法 | ||
1.一种用于猪潜能扩展干细胞的培养基，其特征在于：所述培养基包括以下成分：
DMEM/F-12培养基，KSR，MEM NEAA，谷氨酰胺-青霉素-链霉素，β-巯基乙醇，人LIF蛋白，PD0325901，CHIR99021，JNK抑制剂VIII，SB203580和XAV939。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基包括以下成分：
DMEM/F-12培养基作为基础培养基；基础培养基终体积20%的KSR，1× (vol/vol)的MEMNEAA，1×(vol/vol)的谷氨酰胺-青霉素-链霉素，0.1 mM终浓度的β-巯基乙醇，103 U人LIF蛋白，1.0 μM终浓度的PD0325901，3.0 μM终浓度的CHIR99021，4.0 μM终浓度的JNK抑制剂VIII，10.0 μM终浓度的SB203580和5.0 μM终浓度的XAV939。
3.建立猪潜能扩展干细胞的培育方法，其特征在于包括以下步骤：
将猪8-细胞胚胎加入权利要求1或2所述的培养基中进行培养，经培养、传代和扩增得到猪潜能扩展干细胞。
4.根据权利要求3所述的培育方法，其特征在于包括以下步骤：
从猪受精胚胎获取猪8-细胞胚胎，分别移入96孔SNL给料板或凝胶化板的孔中，加入权利要求1或2所述的培养基，培养所述8-细胞胚胎直到孵化并形成衍生物，将其分离或用口吸管将其机械切成小片，转移到新的96孔SNL给料板或凝胶化板中，继续培养至细胞群落达到80-90%密度，将细胞传代至24孔SNL给料板或凝胶化板中，扩增至6孔板，将所得猪潜能扩展干细胞冷冻于胚胎冷冻液，保存于液氮中。
5.通过权利要求3或4所述培育方法得到的猪潜能扩展干细胞。
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