[发明专利]贝类水产品甲型肝炎病毒纳米PCR快速检测试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 202111337306.2 | 申请日： | 2021-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN113881811A | 公开（公告）日： | 2022-01-04 |
| 发明（设计）人： | 林鹏;励建荣;张德福;李学鹏;林洪;郭晓华 | 申请（专利权）人： | 渤海大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 长春众邦菁华知识产权代理有限公司 22214 | 代理人： | 于晓庆 |
| 地址： | 121000 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 贝类 水产品 肝炎 病毒 纳米 pcr 快速 检测 试剂盒 及其 应用 | ||
1.贝类水产品甲型肝炎病毒纳米PCR快速检测试剂盒，其特征在于，反应体系包括：阳性重组质粒pMD-18T-VP3、2×HiFi Taq酶、胶体金颗粒溶液、上游引物和下游引物；
所述上游引物的序列为：HAV VP3 F：5’-CTGATCCGTCCCAGGGTG-3’；
所述下游引物的序列为：HAV VP3 R：5’-CAGGGAACACGAAATCTCAA A-3’。
2.根据权利要求1所述的贝类水产品甲型肝炎病毒纳米PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述反应体系为20.0μL，所述阳性重组质粒pMD-18T-VP3用量为0.1～1.0μL，所述2×HiFi Taq酶用量为10.0μL，所述胶体金颗粒用量为0.5～4.0μL，所述上游引物的用量为0.5～2.0μL，所述下游引物的用量为0.5～2.0μL。
3.根据权利要求2所述的贝类水产品甲型肝炎病毒纳米PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述阳性重组质粒pMD-18T-VP3的用量为0.5μL，所述2×HiFi Taq酶的用量为10.0μL，所述胶体金颗粒的用量为2.0μL，所述上游引物的用量为0.5μL，所述下游引物的用量为0.5μL。
4.根据权利要求1所述的贝类水产品甲型肝炎病毒纳米PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述阳性重组质粒pMD-18T-VP3的浓度为1.73×107copies/μL。
5.根据权利要求1所述的贝类水产品甲型肝炎病毒纳米PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金颗粒溶液中的胶体金颗粒的直径为20nm。
6.如权利要求1至5中任意一项所述的贝类水产品甲型肝炎病毒纳米PCR快速检测试剂盒的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，利用该试剂盒检测贝类水产品甲型肝炎病毒，包括以下步骤：
以阳性重组质粒pMD-18T-VP3为模板，向检测样本中加入10.0μL 2×HiFi Taq酶、0.5μL胶体金颗粒溶液、0.5μL模板、0.5μL上游引物、0.5μL下游引物，进行PCR扩增，PCR反应条件为：95℃预变形5min；94℃变性30s，51℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃后延伸10min，用去离子水作为阴性对照，所述检测为非诊断目的。
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