[发明专利]基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法

权利要求书

1.基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)采用海区原位监测实验，设置若干个石油类污染监测站位和一个清洁的对照站位；

2)将体长、体重基本一致的健康褐菖鲉置于套有尼龙网的塑料筐中，用绳子悬挂于不同监测站位的标记物上，没入海平面至少1m；

3)监测持续14天，并在最后一天观察褐菖鲉存活情况，取存活褐菖鲉的肝、胆、性腺组织进行生理生化检测；

4)根据个体、组织指标和分子生物标志物响应情况，将海洋石油类生物毒性效应分为五级：若某一监测站位出现褐菖鲉非外伤死亡且存活褐菖鲉中出现组织或分子水平的指标响应的，评为五级；若某一监测站位出现褐菖鲉组织水平的指标响应但未有死亡的，评为四级；若某一监测站位褐菖鲉未有个体或组织水平的指标响应而仅有分子生物标志物响应的，评级区间为一至三级，其中一至三级基于各分子生物标志物的分级系数和IBRv2值进行划分；

所述IBRv2值的算法为：(1)首先将各站位分子生物标志物平均值X，对照站位的生物标志物值X₀按式(1)进行标准化处理：Y＝log(X/X₀)(1)，式(1)中Y为各站位该分子生物标志物的标准化值；(2)计算Y在所有站位的平均值M和标准差S。该分子生物标志物在各站位的均一化值为Z＝(Y-M)/S；(3)定义分子生物标志物偏离指数A，即用某站位分子生物标志物均一化值Z减去对照站位均一化值Z₀，A＝Z-Z₀。(4)分别将各站位A的绝对值|A|加和得到该站位的IBRv2值。

2.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的海区原位监测实验，设置若干个有针对性的石油类污染监测站位，污染监测站位数不少于3个；同时设置一个已知的相对无污染的站位作为对照站位。

3.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤2)所述健康的褐菖鲉为发育正常，体态良好，未处于繁殖期并在室内养殖池暂养10天以上的褐菖鲉。

4.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，每个站点的褐菖鲉为8-15尾。

5.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤3)所述生理生化检测包括肝体比、性体比、肝7-乙氧基异吩恶唑-O-脱乙基酶活性、胆汁萘类代谢物含量、胆汁菲类代谢物含量、胆汁芘类代谢物含量、胆汁苯并[a]芘类代谢物含量。

6.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤4)所述海洋石油类生物毒性效应分为五级具体包括：第一级，为无风险等级，意味着生物体未受到石油类的污染；第二级，为低风险等级，意味着生物体在分子水平对石油类污染的响应程度轻微；第三级，为中风险等级，意味着生物体在分子水平对石油类污染的响应程度加剧，但尚未引起生物体组织水平的响应；第四级，为高风险等级，意味着生物体在组织水平出现了对石油类污染的响应，但尚未引起生物死亡；第五级，为极高风险等级，意味着生物体在个体水平出现了对石油类污染的响应，开始死亡。

7.根据权利要求1所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，步骤4)中，所述一至三级的分级阈值的算法为：(1)定义各分子生物标志物的分级系数：所述5种分子生物标志物即肝EROD活性、胆汁萘类代谢物含量、胆汁菲类代谢物含量、胆汁芘类代谢物含量、胆汁苯并[a]芘类代谢物含量的一级分级系数均为1.2，二级分级系数均为2.0。

8.根据权利要求7所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，根据步骤4)所述的IBRv2值的算法将各分子生物标志物的分级系数进行标准化、均一化和绝对值加和计算后，得到一级分级阈值为2.54，二级分级阈值为9.65。

9.根据权利要求8所述的基于褐菖鲉评估有对照站位石油类生物毒性效应的方法，其特征在于，当监测站位IBRv2值小于一级分级阈值2.54时，该监测站位海洋石油类生物毒性效应风险等级为一级；当监测站位IBRv2值大于等于一级分级阈值2.54且小于二级分级阈值9.65时，该监测站位海洋石油类生物毒性效应风险等级为二级；当监测站位IBRv2值大于等于二级分级阈值9.65时，该监测站位海洋石油类生物毒性效应风险等级为三级。