[发明专利]一种快速评价藜麦穗发芽抗性的方法

权利要求书

1.一种快速评价藜麦穗发芽抗性的方法，具体步骤为：

（1）制备籽粒萌发培养基：每1 L的蒸馏水中加入2%~5%质量的藜麦籽粒壳，熬煮25~30min，然后过滤取上清液，在上清液中加14~17 g琼脂加热溶解，分装于三角瓶，121℃高压灭菌15~20 min，冷却后在0~4℃下冷藏，备用；

（2）制备水活度不同的培养基：将步骤（1）准备好的籽粒萌发培养基加热融化、再冷却至40~50℃时，取100 ml培养基装于200-500ml的无菌三角瓶，重复6次，再在6个三角瓶中分别添加0、14.3、19.3、21.8、29.3和34.3 ml的甘油，趁热充分搅拌混匀，制成水活度分别为1.00、0.98、0.96、094、0.92、0.90的六种不同水活度的培养基，将配置好的培养基趁热倒入直径90 mm的培养皿中，每个培养皿倒8~12 mL，每个水活度重复3~5次；

（3）采集成熟藜麦穗：随机抽取成熟度一致的每个藜麦品种的5~8个单株藜麦主穗，完整剥出藜麦籽粒，尤其不能损坏籽粒壳，每个主穗选取籽粒400-500 粒，取的藜麦籽粒大小、重量尽可能一致，然后将藜麦籽粒浸泡于75%的乙醇10 ~15 s，再无菌水清洗5~7次，用无菌滤纸吸干藜麦籽粒表面残留的无菌水，备用；

（4）籽粒发芽试验：将步骤（3）处理后的藜麦籽粒放分别置于步骤（2）制备的六种水活度培养基，每皿放60~80粒，每个水活度重复3~5次，用封口膜将培养皿封好，将其置于25℃的培养箱中避光培养48~72 h；

（5）籽粒发芽测定：籽粒发芽试验后，以芽长达到种子长度一半为发芽标准，分别统计不同水活度培养基上发芽的籽粒数，计算不同水活度培养基上的发芽率：

发芽率 =（同一水活度培养基发芽的总籽粒数/总籽粒数）×100%；

（6）抗性评价：采用穗发芽抗性综合指数RI评估穗发芽抗性，穗发芽抗性综合指数RI是一个0.0~1.0的数字；

穗发芽抗性综合指数：

其中：Ci =1~6，Ci表示不同水活度的籽粒萌发培养基的级别，分别是：水活度为0.90时，籽粒萌发培养基级别为C1级；水活度为0.92时，籽粒萌发培养基级别为C2级；水活度为0.94时，籽粒萌发培养基级别为C3级；水活度为0.96时，籽粒萌发培养基级别为C4级；水活度为0.98时，籽粒萌发培养基级别为C5级；水活度为1.00时，籽粒萌发培养基级别为C6级；

Fi为第Ci级水活度培养基相应的发芽率(%)；

依据穗发芽抗性综合指数RI确定藜麦品种对穗发芽的抗性，分别是：（1）抗性综合指数RI=0时为免疫，抗性综合指数 0＜RI≤0.1时为高抗，抗性综合指数 0.1＜RI≤0.15时为中抗，抗性综合指数 0.15＜RI≤0.3时为低抗，抗性综合指数 0.3＜RI≤0.5时为低感，抗性综合指数 0.5＜RI≤0.8时为中感，抗性综合指数 0.8＜RI时为高感。