[发明专利]用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒，其特征在于，包括：Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞、HL-7702人肝细胞、T细胞/肝细胞共培养专用培养基、人CD3/CD28 T细胞激活剂、细胞消化液、灭菌PBS溶液。

2.根据权利要求1所述的用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒，其特征在于，所述T细胞/肝细胞共培养专用培养基由体积百分比为79％的RPMI-1640、体积百分比为20％的胎牛血清和体积百分比为1％的100U/mL青链霉素双抗混合液组成，-20℃保存。

3.根据权利要求1所述的用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒，其特征在于，所述人CD3/CD28 T细胞激活剂的使用浓度为25μL/mL，储存条件为2-8℃；所述细胞消化液为用所述T细胞/肝细胞共培养专用培养基配制的质量百分比为0.25％的胰酶溶液，-20℃保存；所述灭菌PBS的质量百分比为5％，-20℃保存。

4.一种基于权利要求1-3任一项所述的试剂盒建立自身免疫性肝炎体外研究模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：先将T细胞和肝细胞在专用培养基内进行共培养，建立“T细胞/肝细胞共培养体系”，然后通过T细胞激活物的诱导，活化T细胞，建立了用于自身免疫性肝炎体外研究的模型。

5.根据权利要求4所述的建立自身免疫性肝炎体外研究模型的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

将HL-7702人肝细胞按细胞数为5×10⁵个/孔的标准用100μL的T细胞/肝细胞共培养专用培养基无菌恒温培养至贴壁；

将Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞采用T细胞/肝细胞共培养专用培养基无菌恒温培养至贴壁，进行常规传代、换液后，调整至5×10⁶个/mL备用；

在培养至已贴壁的HL-7702人肝细胞培养孔内，吸弃原有培养基，用灭菌的质量百分比为5％的PBS溶液洗2次后，每孔加入100μL已调整细胞浓度的Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞悬液，继续共培养12h；

在上述共培养体系内，按2.5μL/孔的剂量加入人CD3/CD28 T细胞激活剂，继续培养12h，即获得自身免疫性肝炎体外研究模型。

6.根据权利要求5所述的建立自身免疫性肝炎体外研究模型的方法，其特征在于，所述人CD3/CD28 T细胞激活剂的浓度为25μL/mL。

7.根据权利要求5所述的建立自身免疫性肝炎体外研究模型的方法，其特征在于，所述HL-7702人肝细胞和Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞的培养条件为：37℃，5％CO₂，PH值7.2-7.4。