[发明专利]用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒及方法

说明书

本发明属于医学实验模型研究技术领域，针对“T细胞介导肝细胞损伤”的体外研究模型对自身免疫性肝炎研究的重要性，公开了一种用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒及方法。所述试剂盒包括：Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞、HL‑7702人肝细胞、T细胞/肝细胞共培养专用培养基、人CD3/CD28T细胞激活剂、细胞消化液、灭菌PBS溶液。所述方法是先将T细胞和肝细胞在专用培养基内进行共培养，建立“T细胞/肝细胞共培养体系”，然后通过T细胞激活物的诱导，活化T细胞，并通过T细胞表达细胞因子，引起肝细胞损伤，从而在体外部分模拟人类自身免疫性肝炎的发病过程。具有“一站式”、快捷、稳定的特点，并可以降低种属差异对后续实验结果的影响。

技术领域

本发明属于医学实验模型研究技术领域，具体为一种用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒及方法。

背景技术

自身免疫性肝炎是一种针对肝细胞的异常免疫反应导致的慢性进行性肝病，其特点是免疫球蛋白水平升高、自身抗肝抗原抗体的存在、形态学表现为界面型肝炎。自身免疫性肝炎患者会出现血清转氨酶升高、炎性细胞因子的异常表达，以及严重的肝坏死和细胞凋亡，如果不及时治疗，可能会发展为肝纤维化、肝功能衰竭等。本病的病因以及发病机制尚不清楚，目前认为是由于遗传易感性及环境诱发因素等共同作用引起的自身免疫耐受缺失，从而诱导产生以T细胞介导为主的针对肝脏抗原的免疫反应，造成肝脏组织的破坏及炎症的形成。

自身免疫性肝炎动物模型的研究已有较好的发展，但有关可以用于自身免疫性肝炎发病机制及治疗机制的细胞模型相对较少。尤其是可以快速、稳定、简便地体外模拟T细胞介导肝细胞损伤的病理生理过程的细胞模型，目前尚未见相关报道。这在一定程度上，阻碍了自身免疫肝炎发病机制及治疗机制的研究进展，如开展目的基因过表达或沉默研究等。因此，如能制备一款可以快速、稳定、一站式地建立“T细胞介导肝细胞损伤”的体外研究模型，将有助于自身免疫性肝炎的发病机制研究及开发有效的治疗药物。

发明内容

针对“T细胞介导肝细胞损伤”的体外研究模型对自身免疫性肝炎发病机制的研究及有效治疗药物开发的重要性，本发明提供了一种可用于快速建立人源性“T细胞介导肝细胞损伤”体外研究模型的试剂盒及方法。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

本发明提供一种用于建立自身免疫性肝炎体外研究模型的试剂盒，包括：Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞、HL-7702人肝细胞、T细胞/肝细胞共培养专用培养基、人CD3/CD28T细胞激活剂、细胞消化液、灭菌PBS溶液。本试剂盒仅用于科学研究，不用于临床诊断或治疗。

进一步，所述T细胞/肝细胞共培养专用培养基由79％RPMI-1640(V/V％)、20％胎牛血清(V/V％)和1％100U/mL青链霉素双抗混合液(V/V％)组成，-20℃保存。

进一步，所述人CD3/CD28 T细胞激活剂的使用浓度为25μL/mL，储存条件为2-8℃。

进一步，所述细胞消化液为用所述T细胞/肝细胞共培养专用培养基配置的0.25％胰酶溶液(wt％)，-20℃保存。

进一步，所述灭菌PBS的质量百分比为5％，保存于-20℃。

本发明还提供一种基于上述试剂盒建立自身免疫性肝炎体外研究模型的方法，包括以下步骤：先将T细胞和肝细胞在专用培养基内进行共培养，建立“T细胞/肝细胞共培养体系”，然后通过T细胞激活物的诱导活化T细胞，以造成肝细胞损伤，从而建立了“T细胞介导肝细胞损伤”体外研究模型，即本发明所述的用于自身免疫性肝炎体外研究的模型，从而用于体外模拟自身免疫性肝炎的部分发病机制。T细胞激活物为由可结合CD3和CD28的可溶性抗体复合物组成的人CD3/CD28 T细胞激活剂，可以为T细胞激活提供所需的初级和共刺激信号，活化T细胞后，通过表达IFN-γ、TNF-α等细胞因子，引起肝细胞损伤。

进一步，所述建立自身免疫性肝炎体外研究模型的方法，具体包括以下步骤：