[发明专利]胚胎玻璃化冷冻方法和使用的冷冻液

权利要求书

1.牛体外受精胚胎玻璃化冷冻的方法，其包括如下步骤：

(1)提供玻璃化冷冻液、冷冻预处理液、解冻液、冷冻管；

(2)通过冷冻管抽吸端施力，从冷冻管入口一端，依次向管内吸入：解冻液6~8cm、空气0.5~1cm、玻璃化冷冻液0.4~0.6cm、空气0.5~1cm、包含胚胎的玻璃化冷冻液0.4~0.6cm、空气0.5~1cm、解冻液0.5~1cm；

(3)分别在上端的解冻液上部、下端的解冻液下部封口，使步骤(2)吸入的七段密封于冷冻管内，接着将冷冻管置液氮中冷冻，

其特征是：

所述解冻液是用Dulbecco’s磷酸盐缓冲液为基础液配制成含0.5mol/L蔗糖的溶液；

所述玻璃化冷冻液为增补添加了油酸钠和酒石酸钾的EFS30，其中油酸钠的浓度为0.02~0.05mg/ml，酒石酸钾的浓度为0.1~0.25mg/ml；

冷冻管两端封口后，解冻液总长度与冷冻液总长度之比为5~10；

所述冷冻管为聚丙烯材质的冷冻管，其具有1~5mm的内径。

2.根据权利要求1的方法，其中冷冻管两端封口后，解冻液总长度与冷冻液总长度之比为5~8。

3.根据权利要求1的方法，其中冷冻管两端封口后，解冻液总长度与冷冻液总长度之比为6。

4.根据权利要求1的方法，其中所述冷冻管具有1~4mm的内径。

5.根据权利要求1的方法，其中所述冷冻管具有1~3mm的内径。

6.根据权利要求1的方法，其中所述冷冻管具有2mm的内径。

7.根据权利要求1的方法，其中所述冷冻管的抽吸端膨大。

8.根据权利要求1的方法，其中所述包含胚胎的玻璃化冷冻液是如下方式制备的：挑选体外培养合格的胚胎，置10%乙二醇溶液中预处理5~10秒后，转移至玻璃化冷冻液中，即得。

9.根据权利要求1的方法，其中玻璃化冷冻液中油酸钠的浓度为0.02~0.04mg/ml。

10.根据权利要求1的方法，其中玻璃化冷冻液中油酸钠的浓度为0.02~0.03mg/ml。

11.根据权利要求1的方法，其中玻璃化冷冻液中油酸钠的浓度为0.025mg/ml。

12.根据权利要求1的方法，其中玻璃化冷冻液中酒石酸钾的浓度为0.1~0.2mg/ml。

13.根据权利要求1的方法，其中玻璃化冷冻液中酒石酸钾的浓度为0.1~0.15mg/ml。

14.根据权利要求1的方法，其中玻璃化冷冻液中酒石酸钾的浓度为0.125mg/ml。

15.根据权利要求1的方法，所述玻璃化冷冻液中还增补添加了3mmol/L烟酰胺。

16.根据权利要求1的方法，其中所述冷冻管包括：

管体，其为一细长的空心管，

膨胀部，其下部与管体的上端连通，通过挤压和放松能够使该膨胀部内的空气排出和吸入，

信息标签，其设置于膨胀部的上方，用于标记胚胎冷冻管内封装物料的信息，

管口，其设置于管体的下端，空气和液体物质能够经由其自由通过进入管体内。

17.根据权利要求16的方法，所述冷冻管的管体外表刻印有物料吸入位置标线。

18.根据权利要求16的方法，所述冷冻管的管体外表刻印有主公制标尺线。