[发明专利]胚胎玻璃化冷冻方法和使用的冷冻液

说明书

本发明涉及胚胎玻璃化冷冻方法和使用的冷冻液。具体地说，提供的牛体外受精胚胎培养的方法包括如下步骤：提供玻璃化冷冻液、冷冻预处理液、解冻液、冷冻管；通过冷冻管抽吸端施力，从冷冻管入口一端，依次向管内吸入：解冻液、空气、玻璃化冷冻液、空气、包含胚胎的玻璃化冷冻液、空气、解冻液；分别在上端的解冻液上部、下端的解冻液下部封口，使吸入的七段密封于冷冻管内，接着将冷冻管置液氮中冷冻。其中所述冷冻管包括：管体；膨胀部，其下部与管体的上端连通；设置于膨胀部上方的信息标签；设置于管体下端的管口。本发明的方法和所用的冷冻液呈现如说明书所述优良效果。

技术领域

本发明属于动物繁殖技术领域，涉及一种用于农业-畜牧兽医繁殖的技术，具体涉及一种牛体外受精的方法，另外，本发明还涉及牛体外受精中使用的相关工作试液在牛体外受精中的应用，尤其是，涉及一种具有优良效果的牛体外受精胚胎玻璃化冷冻方法。本发明牛体外受精胚胎玻璃化冷冻方法具有优异的技术效果。本申请还另外涉及一种胚胎冷冻管，例如可用于牛体外受精胚胎玻璃化冷冻的麦管。本申请的胚胎玻璃化冷冻方法可以通过使用本申请记载的胚胎冷冻管，方便地进行胚胎玻璃化冷冻封装操作。

背景技术

体外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为IVF。由于它与胚胎移植技术(ET)密不可分，又简称为IVF-ET。在生物学中，把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tube animal)。这项技术成功于20世纪50年代，在最近20年发展迅速，现已日趋成熟而成为一项重要而常规的动物繁殖生物技术。

体外受精技术对动物生殖机理研究、畜牧生产、医学和濒危动物保护等具有重要意义。如用小鼠、大鼠或家兔等作实验材料，体外受精技术可用于研究哺乳动物配子发生、受精和胚胎早期发育机理。在家畜品种改良中，体外受精技术为胚胎生产提供了廉价而高效的手段，对充分利用优良品种资源，缩短家畜繁殖周期，加快品种改良速度等有重要价值。在人类，IVF-ET技术是治疗某些不孕症和克服性连锁病的重要措施之一。体外受精技术还是哺乳动物胚胎移植、克隆、转基因和性别控制等现代生物技术不可缺少的组成部分。

随着现代农业科技的发展，为了更充分利用良种母牛的繁殖潜力，加速遗传育种进程，在生产实践中应用高效的繁殖新技术成为必然。活体采卵(Ovum pick UP，OPU)和体外受精技术(In Vitro Fertilization，IVF)是二十世纪八十年代快速发展起来的胚胎工程新技术，二者相结合可获得大量遗传系谱明确的胚胎，从而缩短世代间隔。目前，这两种技术已经成为欧美和大洋洲等畜牧业发达国家的农场主为扩大良种母牛群而采用的重要繁殖技术。然而，采用常规的牛胚胎培养体系(CR1aa和SOF液)，牛体外受精的囊胚发育率较低，而且胚胎质量也远不及体内胚胎，导致胚胎移植受体后的妊娠率低，因此如何提高囊胚发育率及胚胎质量成为体外受精胚胎生产的重点和研究的焦点。

早在1878年，德国人Scnenk就以家兔和豚鼠为材料，开始探索哺乳动物的体外受精技术。但直到1951年，美籍华人张民觉和Austin分别发现精子体外获能现象后，体外受精技术才获得了突破性进展。牛体外受精技术受到卵母细胞的体外成熟、精子的体外获能、受精卵的体外培养环境等多个方面的影响。