[发明专利]一种用于重组蛋白的高糖基化修饰序列及其重组猪促卵泡激素和应用

权利要求书

1.一种用于重组蛋白的高糖基化修饰序列，其特征在于，所述高糖基化修饰序列的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，经毕赤酵母密码子优化后的核酸序列如序列表SEQID NO.2所示。

2.由权利要求1所述的高糖基化修饰序列，其特征在于，所述高糖基化修饰序列用于蛋白重组融合，高糖基化修饰序列的数量为1个或以上；

所述高糖基化修饰序列位于重组蛋白的一端或两端。

3.一种权利要求1或2所述的高糖基化修饰序列应用于制备重组蛋白。

4.一种权利要求3所述的重组蛋白应用于哺乳动物的超数排卵。

5.一种重组猪促卵泡激素，其特征在于，所述重组猪促卵泡激素为猪促卵泡激素的重组蛋白，其为猪促卵泡激素基因与权利要求1所述的高糖基化修饰序列进行重组融合得到；

所述高糖基化修饰序列位于猪促卵泡激素基因的一端或两端。

6.由权利要求5所述的重组猪促卵泡激素，其特征在于，所述重组猪促卵泡激素包括如序列表SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列；

所述氨基酸序列经毕赤酵母密码子优化后的核酸序列分别如序列表SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.10所示。

7.一种权利要求5或6所述的重组猪促卵泡激素应用于猪的超数排卵。

8.一种重组猪促卵泡激素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将权利要求1所述高糖基化修饰序列与猪促卵泡激素基因连接，在得到的目的基因C端引入标签和终止密码子，上下游引入酶切位点，合成于载体质粒上，双酶切后克隆至表达载体上，采用毕赤酵母甲醇诱导表达系统进行表达、诱导、纯化后得到重组猪促卵泡激素。

9.由权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体包括毕赤酵母表达载体pPICZαA、pPICZαB、pPICZαC、pGAPZαA、pGAPZαB、pGAPZαC、pPIC9K、pPIC9、pHIL-S1、pYAM75P、pPIC3、pPIC3K、pPIC3.5K、pHIL-D2、pACO815、pPICZA、pPICZB、pPICZC、pGAPZA、pGAPZB、pGAPZC、pPink-hc的一种。

10.由权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述毕赤酵母甲醇诱导表达系统采用的毕赤酵母宿主菌包括X33、GS115、KM71、SMD1168、SMD1165、SMD1163、Y-11430、M-G100-3、配套毕赤酵母Pichiapink的一种。