[发明专利]一种原代干细胞的培养方法

权利要求书

1.一种原代干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

第0天，从脐带中剥胶分离出相应组织块，将剥离的组织块经过Ⅱ型胶原酶Ⅱ消化处理10～60分钟；终止消化后，洗涤消化后的组织块；将洗涤后的组织块直接接种到培养瓶中，添加干细胞培养基后将培养瓶静置于培养箱中进行干细胞培养；

第2天和第4天，分别往培养瓶中添加干细胞培养基；

第7天，对培养瓶进行全量换液，并将换下的营养液转移至离心管中离心处理，离心停止后，去除上清，将保留的沉底转入培养瓶中并再添加干细胞培养基，继续培养；

第10天和第13天，对培养瓶进行半量换液，再添加干细胞培养基；

第15天，停止培养，往培养瓶中加入消化液进行细胞的消化并使细胞脱离培养瓶壁，收集细胞并进行洗涤后获得原代干细胞。

2.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，第0天中，所述Ⅱ型胶原酶的浓度为0.01％-0.5％。

3.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，第0天中，所述培养瓶采用T175培养瓶。

4.根据权利要求3所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，所述组织块直接接种到培养瓶中时，所述组织块接种量为每个T175培养瓶中接种量为2～20mL且干细胞培养基添加量为5～30mL。

5.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，第2天至第13天，每次添加干细胞培养基量为2～20mL。

6.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，第15天中，所述消化液为浓度0.01％-0.25％的胰酶。

7.根据权利要求1至6任一所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，所述干细胞培养基为αMEM培养基或DMEM/F12培养基。

8.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，所述培养箱中，温度为37℃、CO₂体积百分比为含量为5％、相对饱和湿度为100％。