[发明专利]一种高产天然水蛭素的大肠杆菌工程菌株及其应用

权利要求书

1.一种高产天然水蛭素的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，以模式生物大肠杆菌（Escherichia coli）为基础，通过游离质粒共表达编码水蛭素的基因hv和编码水蛭酪氨酸磺酸转移酶的基因TPS；hv的核苷酸序列如SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7或SEQ ID NO. 8所示；TPS的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

2.根据权利要求1所述的高产天然水蛭素的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，所述质粒为pET28a(+)。

3.根据权利要求1所述的高产天然水蛭素的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，所述模式生物大肠杆菌为大肠杆菌E. coli BL21。

4.权利要求1所述高产天然水蛭素的大肠杆菌工程菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）构建携带有编码水蛭素的基因hv和编码水蛭酪氨酸磺酸转移酶的基因TPS的表达载体；

2）以大肠杆菌为宿主，转化步骤1）得到的表达载体，获得高产天然水蛭素的大肠杆菌工程菌株。

5.权利要求1所述的大肠杆菌工程菌株在一步发酵生产天然水蛭素中的应用，其特征在于，将大肠杆菌工程菌株活化后，转接到发酵培养基中20-37℃进行发酵培养，培养至OD_{600 nm}为0.6-0.8，加入终浓度为0.01-1 mM的IPTG，诱导5 h后离心收集菌体。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基的配方为：每升培养基中含5-40 g酵母粉，5-20 g蛋白胨，2-15 g磷酸氢二钾，0.5-6 g磷酸二氢钾和1-8 mL甘油。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基的配方为：每升培养基中含5-40 g酵母粉，5-20 g蛋白胨，2-15 g磷酸氢二钾，0.5-6 g磷酸二氢钾和20-100 g葡萄糖。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，发酵培养温度为37℃；IPTG的浓度为0.1mM。