[发明专利]CD127在制备检测再生障碍性贫血免疫异常标志物试剂盒中的应用

权利要求书

1.CD127在制备检测再生障碍性贫血免疫异常标志物试剂盒中的应用，其特征在于：所述的CD127是CD8⁺CD45RO^-CD27^-T细胞中CD127⁺T细胞所占比例和CD127表达水平。

2.一种检测再生障碍性贫血免疫异常标志物的试剂盒，其特征在于：包括如下检测CD8⁺CD45RO^-CD27^-T细胞亚群的不同的荧光标记的单克隆抗体：抗CD8抗体、抗CD45RO抗体、抗CD27抗体和抗CD127抗体。

3.根据权利要求2所述的检测再生障碍性贫血免疫异常标志物的试剂盒，其特征在于：

所述的抗CD8抗体的荧光标记为PerCp-Cy5.5；

所述的抗CD45RO抗体的荧光标记为BV510；

所述的抗CD27抗体的荧光标记为PE-Cy7；

所述的抗CD127抗体的荧光标记为PE。

4.根据权利要求2所述的检测再生障碍性贫血免疫异常标志物的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括用于裂解外周血红细胞的红细胞裂解液、细胞染色缓冲液和磷酸盐缓冲溶液中的至少一种。

5.权利要求2～4任一项所述的试剂盒在非疾病诊断或治疗目的的检测CD8⁺CD45RO^-CD27^-T细胞亚群中CD127⁺T细胞比例和CD127表达水平中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于包括如下步骤：

(1)处理待检测外周血样本，形成单细胞悬液；

(2)在步骤(1)得到的单细胞悬液中加入标记不同荧光的单克隆抗体：抗CD8抗体、抗CD45RO抗体、抗CD27抗体和抗CD127抗体，轻轻混匀后避光孵育；

(3)洗涤细胞后加入细胞染色缓冲液重悬细胞，流式细胞仪上机检测，获得荧光标记后的CD8⁺CD45RO^-CD27^-T细胞亚群中CD127⁺T细胞比例和CD127表达水平的相关数据。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

所述的抗CD8抗体的荧光标记为PerCp-Cy5.5；

所述的抗CD45RO抗体的荧光标记为BV510；

所述的抗CD27抗体的荧光标记为PE-Cy7；

所述的抗CD127抗体的荧光标记为PE。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

步骤(1)中所述的处理待检测外周血样本的具体步骤如下：将待测外周血依据常规方法进行全血红细胞裂解处理，离心去上清，并用细胞染色缓冲液重悬得到单细胞悬液；

所述的细胞染色缓冲液的用量为按其与所述的待检测外周血样本＝体积比1：1.5～2.5配比计算；

步骤(2)中所述的避光孵育的具体操作为室温避光孵育15～30分钟；

步骤(3)中所述的洗涤是使用细胞染色缓冲液进行洗涤。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

步骤(2)中所述的抗CD8抗体的加入量按每100μL的单细胞悬液配比3-6μL抗CD8抗体计算；

步骤(2)中所述的抗C45RO抗体的加入量按每100μL的单细胞悬液配比3-6μL抗CD45RO抗体计算；

步骤(2)中所述的抗CD27抗体的加入量按每100μL的单细胞悬液配比3-6μL抗CD27抗体计算；

步骤(2)中所述的抗CD127抗体的加入量按每100μL的单细胞悬液配比3-6μL抗CD127抗体计算。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

对所述的CD127⁺T细胞在CD8⁺CD45RO^-CD27^-T细胞中的所占比例和表达水平进行统计学分析，当检测到CD127⁺T细胞在CD8⁺CD45RO^-CD27^-T细胞中的所占比例中位数低于14.30％时，且CD127表达水平低于26.1，表明再生障碍贫血患者CD8⁺CD45RO^-CD27^-T细胞免疫功能异常可能性较大，可以作为今后临床靶向性调控与AA发病密切相关的CD8⁺CD45RO^-CD27^-T细胞免疫功能异常的潜在治疗靶点。