[发明专利]一种酶促化学发光试剂盒、制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种酶促化学发光试剂盒，其特征在于，包括有：

磁微粒抗体工作液，由磁微粒母液和磁微粒稀释液配制而成，所述磁微粒母液是链霉亲和素磁微粒抗体母液，所述磁微粒稀释液包含第一PH缓冲液、第一蛋白质稳定剂、第二蛋白质稳定剂、第一防腐剂、氯化钠；

酶标抗体工作液，由酶标记抗体母液和酶标抗体稀释液配制而成，所述酶标记抗体母液是碱性磷酸酶标记单克隆抗体母液，所述酶标抗体稀释液包含第二PH缓冲液、第三蛋白质稳定剂、第四蛋白质稳定剂、第二防腐剂、第一离子、第二离子，所述第一离子和第二离子是锌离子、镁离子或钙离子；

清洗液，包含第三PH缓冲液、氯化钠、第一表面活性剂、第二表面活性剂、第三防腐剂和第四防腐剂；

其中，所述第一PH缓冲液、第二PH缓冲液和第三PH缓冲液的缓冲范围为pH 5.0～8.5，浓度为10～200mmol/L(优选浓度为20mmol/L或50mmol/L)，所述第一蛋白质稳定剂、第二蛋白质稳定剂、第三蛋白质稳定剂和第四蛋白稳定性剂的质量百分浓度为0.1％～10％，所述第一防腐剂、第二防腐剂、第三防腐剂和第四防腐剂的质量百分浓度为0.01％-5％，所述第一表面活性剂和第二表面活性剂的质量百分浓度为0.001％～5％。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁微粒抗体母液由链霉亲和素磁微粒、第一PB缓冲液、生物素标记抗体制备而成，而且所述链霉亲和素磁微粒与生物素标记抗体的质量比为50～400:1。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗体由待标记抗体、生物素酯、无水N,N-二甲基酰胺溶剂和第二PB缓冲液制备而成，且所述待标记抗体与生物素酯的摩尔浓度比为1：5～20。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素酯为长臂生物素酯，其结构式为：

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述第一PB缓冲液和第二PB缓冲液的pH值为7.4，浓度为20mmol/L。

6.根据权利要求1至4中任一所述的试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记单克隆抗体母液由单克隆抗体、碱性磷酸酶制备而成。

7.根据权利要求1至4中任一所述的试剂盒，其特征在于，所述第一PH缓冲液、第二PH缓冲液和第三PH缓冲液为2-(N-吗啡啉)乙磺酸、Tris-盐酸或三羟甲基氨基甲烷、MOPSO缓冲剂中的一种，所述第一蛋白质稳定剂、第二蛋白质稳定剂、第三蛋白质稳定剂和第四蛋白质稳定剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶、醇类或糖类中的一种或多种，所述第一防腐剂、第二防腐剂、第三防腐剂和第四防腐剂为NaN3防腐剂、Proclin300防腐剂、BND防腐剂中的一种，所述第一表面活性剂和第二表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠、季铵化物、吐温或脂肪酸山梨坦中的一种。

8.一种权利要求1-7中任一所述试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

S1.磁微粒抗体工作液的制备，具体为：

S11.将链霉亲和素磁微粒包被生物素标记抗体，制得磁微粒母液；

S12.将第一PH缓冲液、第一蛋白质稳定剂、第二蛋白质稳定剂、第一防腐剂、氯化钠混合，配制磁微粒稀释液；

S13.将磁微粒母液用磁微粒稀释液进行稀释，配制成磁微粒抗体工作液；

S2.酶标抗体工作液制备，具体为：

S21.使用蛋白连接试剂盒将单克隆抗体与碱性磷酸酶连接起来后进行超滤或脱盐，得到碱性磷酸酶标记单克隆抗体，作为酶标记抗体母液；

S22.将第二PH缓冲液、第三蛋白质稳定剂、第四蛋白质稳定剂、第二防腐剂、第一离子、第二离子混合，配制酶标抗体稀释液；

S23.用酶标抗体稀释液稀释酶标记抗体母液，配制成酶标抗体工作液；

S3.反应模式建立，具体为：

S31.检测样本体积优化，确定最优加样体积；

S32反应模式：待检样本、磁微粒抗体工作液、酶标抗体工作液，37℃温育反应后，洗涤，加入化学发光底物液，检测光信号值。