[发明专利]一种酶促化学发光试剂盒、制备方法及检测方法

说明书

本发明所述的酶促化学发光试剂盒，包括磁微粒抗体工作液、酶标抗体工作液和清洗液。通过采用磁微粒化学发光免疫分析方法，并运用双抗体夹心法原理，将样本、单克隆抗体包被的磁微粒、碱性磷酸酶标记的单克隆抗体混合，经过温育反应，使样本中的抗原与双抗体结合，形成“磁微粒‑包被抗体‑待测样本‑标记抗体‑酶”夹心复合物，之后引入磁场、洗涤去除未结合的组分、加入化学发光底物液后，底物液被酶催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，激发态中间体回到基态时释放出光子，发光仪捕获光子信号，由光子信号的强弱对待测物定性或定量检测。可以快速搭建稳定的磁微粒化学发光法研发平台，具有反应体系小，成本低，反应体系灵活，效率高的优点。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种酶促化学发光试剂盒、制备方法及检测方法。

背景技术

磁微粒化学发光免疫分析方法是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的一种新兴分析方法，该技术充分利用了磁性分离技术的快速、易自动化性，化学发光技术的高灵敏度、以及免疫分析的特异性，是一种高度敏感的微量测量技术。

目前，磁微粒化学发光己经应用于管式化学发光以及电化学发光免疫检测，但是申请人发现：由于磁微粒化学发光在应用于管式化学发光以及电化学发光免疫检测时需要化学发光试剂与化学发光仪器匹配组成封闭的体系，在化学发光试剂与化学发光仪器均处于开发初期，由于没有任何调试的标准，使得不确定性的因素多，开发难度极大。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可快速搭建稳定的磁微粒化学发光法研发平台，同时具有反应体系小，成本低，反应体系灵活，效率高的酶促化学发光试剂盒、制备方法和检测方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

本发明提供了一种酶促化学发光试剂盒，包括有：

磁微粒抗体工作液，由磁微粒母液和磁微粒稀释液配制而成，所述磁微粒母液是链霉亲和素磁微粒抗体母液，所述磁微粒稀释液包含第一PH缓冲液、第一蛋白质稳定剂、第二蛋白质稳定剂、第一防腐剂、氯化钠；

酶标抗体工作液，由酶标记抗体母液和酶标抗体稀释液配制而成，所述酶标记抗体母液是碱性磷酸酶标记单克隆抗体母液，所述酶标抗体稀释液包含第二PH缓冲液、第三蛋白质稳定剂、第四蛋白质稳定剂、第二防腐剂、第一离子、第二离子，所述第一离子和第二离子是锌离子、镁离子或钙离子；

清洗液，包含第三PH缓冲液、氯化钠、第一表面活性剂、第二表面活性剂、第三防腐剂和第四防腐剂；

其中，所述第一PH缓冲液、第二PH缓冲液和第三PH缓冲液的缓冲范围为pH 5.0～8.5，浓度为10～200mmol/L，所述第一蛋白质稳定剂、第二蛋白质稳定剂、第三蛋白质稳定剂和第四蛋白质稳定剂的质量百分浓度为0.1％～10％，所述第一防腐剂、第二防腐剂、第三防腐剂和第四防腐剂的质量百分浓度为0.01％～5％，所述第一表面活性剂和第二表面活性剂的质量百分浓度为0.001％～5％。

进一步地，所述链霉亲和素磁微粒抗体母液由链霉亲和素磁微粒、第一PB缓冲液、生物素标记抗体制备而成，而且所述链霉亲和素磁微粒与生物素标记抗体的质量比为。

进一步地，所述生物素标记抗体由待标记抗体、生物素酯、无水N,N-二甲基酰胺溶剂和第二PB缓冲液制备而成，且所述待标记抗体与生物素酯的摩尔浓度比为1：5～20。

进一步地，所述生物素酯为长臂生物素酯，其结构式为：

进一步地，所述第一PB缓冲液和第二PB缓冲液的pH值为7.4，浓度为20mmol/L。

进一步地，所述碱性磷酸酶标记单克隆抗体母液由单克隆抗体、碱性磷酸酶制备而成。