[发明专利]一种与门基因电路及获取该与门基因电路的方法在审
| 申请号： | 202111355858.6 | 申请日： | 2021-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN114075572A | 公开（公告）日： | 2022-02-22 |
| 发明（设计）人： | 余裕;姜长安 | 申请（专利权）人： | 珠海中科先进技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/55;C12N15/113;C12N15/65;C12N15/64 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 赖定珍 |
| 地址： | 519080 广东省珠海市高新区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 与门 基因 电路 获取 方法 | ||
1.一种与门基因电路，其特征在于，包括依次连接的第一端序列、引导序列和第二端序列；
所述第一端序列至少包括依次连接的CasRx-C端序列和第一启动子；
所述引导序列至少包括依次连接的引导启动子和gRNA序列，所述引导启动子为H1启动子或U6启动子，所述引导启动子的上游端与所述第一启动子的下游端相连；
所述第二端序列至少包括依次连接的第二启动子和CasRx-N端序列，所述第二启动子的上游端与所述gRNA序列的下游端相连；
所述CasRx-C端序列与所述CasRx-N端序列均由CasRx的编码基因于拆分位点分拆得到，所述拆分位点位于所述CasRx的氨基酸序列的三维预测结构的二级结构铰链区。
2.如权利要求1所述的与门基因电路，其特征在于，所述第一启动子与所述第二启动子均为EF1 a-core双向启动子。
3.如权利要求1所述的与门基因电路，其特征在于，所述第一启动子为EF1 a-core启动子，所述第二启动子为tac启动子。
4.如权利要求1所述的与门基因电路，其特征在于，在所述CasRx-C端序列远离所述第一启动子的上游端，还连接有C端序列荧光蛋白序列；
在所述第二启动子和所述CasRx-N端序列之间，还连接有N端序列荧光蛋白序列。
5.如权利要求4所述的与门基因电路，其特征在于，在所述CasRx-C端序列和所述第一启动子之间，还连接有C端序列Intein序列。
6.如权利要求1所述的与门基因电路，其特征在于，所述第一端序列至少包括依次连接的所述第一启动子、C端序列Intein序列、CasRx-C端序列、GGGs蛋白序列、C端序列荧光蛋白序列、NLS蛋白序列和3'UTR段。
7.如权利要求1所述的与门基因电路，其特征在于，在所述CasRx-N端序列和所述3'UTR段之间，还连接有N端序列Intein序列。
8.如权利要求1所述的与门基因电路，其特征在于，所述第二端序列至少包括依次连接的所述引导启动子、gRNA序列、第二启动子、NLS蛋白序列、N端序列荧光蛋白序列、GGGs蛋白序列、CasRx-N端序列、N端序列Intein序列和3'UTR段。
9.如权利要求6或8任一项所述的与门基因电路，其特征在于，所述3'UTR段内均设置有mi RNA位点。
10.一种获取权利要求1-9任一项所述与门基因电路的方法,其特征在于,包括下列步骤：
步骤1：基于CasRx的氨基酸序列，获取所述CasRx的三维预测结构；
步骤2：在所述CasRx的三维预测结构的二级结构铰链区，选取拆分位点；
步骤3：在所述拆分位点分拆所述CasRx的编码基因，分别得到CasRx-C端序列和CasRx-N端序列；
步骤4：获取第一启动子和第二启动子，在所述CasRx-C端序列的上游端连接所述第一启动子，得到第一端序列；
在所述CasRx-N端序列的下游端连接所述第二启动子，得到第二端序列；
获取gRNA序列和引导启动子，将所述gRNA序列的上游端和所述引导启动子的下游端相连，得到引导序列，所述引导启动子为H1启动子或U6启动子；
步骤5：将所述第一端序列的第一启动子的下游端与所述引导序列的引导启动子的上游端相连，将所述第二端序列的第二启动子的上游端与所述gRNA序列的下游端相连，即得到与门基因电路。
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