[发明专利]一种与门基因电路及获取该与门基因电路的方法

说明书

本发明提供一种与门基因电路及获取该与门基因电路的方法，属于基因工程技术领域。所述与门基因电路包括依次连接的第一端序列、引导序列和第二端序列；第一端序列包括依次连接的CasRx‑C端序列、第一启动子；引导序列至少包括依次连接的引导启动子和gRNA序列；第二端序列至少包括第二启动子和CasRx‑N端序列，CasRx‑C端序列与CasRx‑N端序列的拆分位点位于CasRx的氨基酸序列的三维预测结构的二级结构铰链区。本发明还公开了获取上述与门基因电路的方法。本发明当第一启动子与第二启动子为不同的启动子时，则可以利用类似与门电路的特点，只有在两个启动子能够正常发挥功能前提条件下，重新融合后的CasRx才能发挥基因编辑效应，从而可以快速判断两种启动子是否互相干扰。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种与门基因电路及获取该与门基因电路的方法。

背景技术

随着基因工程技术和细胞生物学方面的不断发展，人类可以完整认识生命过程并加以预测甚至精细控制，并进一步使得合成生物学开始迅速发展。基因电路作为合成生物学研究的领域之一，通过设计和构建生命体中不存在的生物组件和系统，有助于解决癌症、基因缺陷等问题。在基因工程中，往往涉及使用多个启动子，以分别启动不同的功能区。

但随着启动子的日益复杂化，多种启动子联用时常常会出现相互干扰导致无法正常工作的情况，而SpCas9或SaCas9均是基于DNA层面进行编辑，它们的基因片段大小均大于3000bp。在临床基因治疗时，因为片段过长，导致治疗载体AAV病毒必须分开装配，执行效率较低。因此，亟待提供一种较为高效的基因电路，能够实现测试两种启动子是否互相干扰的功能。

发明内容

本发明的目的是提供一种与门基因电路及获取与门基因电路的方法，以至少部分地解决上述的技术问题。

根据本发明的一个方面，提供一种与门基因电路，包括依次连接的第一端序列、引导序列和第二端序列；

所述第一端序列至少包括依次连接的CasRx-C端序列和第一启动子；

所述引导序列至少包括依次连接的引导启动子和gRNA序列，所述引导启动子为H1启动子或U6启动子，所述引导启动子的上游端与所述第一启动子的下游端相连；

所述第二端序列至少包括依次连接的第二启动子和CasRx-N端序列，所述第二启动子的上游端与所述gRNA序列的下游端相连；

所述CasRx-C端序列与所述CasRx-N端序列均由CasRx的编码基因于拆分位点分拆得到，所述拆分位点位于所述CasRx的氨基酸序列的三维预测结构的二级结构铰链区。

优选地，所述第一启动子与所述第二启动子均为EF1a-core双向启动子。

优选地，所述第一启动子为EF1a-core启动子，所述第二启动子为tac启动子。

优选地，在所述CasRx-C端序列远离所述第一启动子的上游端，还连接有C端序列荧光蛋白序列；

在所述第二启动子和所述CasRx-N端序列之间，还连接有N端序列荧光蛋白序列。

优选地，在所述CasRx-C端序列和所述第一启动子之间，还连接有如SEQ ID NO.5所示的C端序列Intein序列。

优选地，所述第一端序列至少包括依次连接的所述第一启动子、所述C端序列Intein序列、所述CasRx-C端序列、GGGs蛋白序列、所述C端序列荧光蛋白序列、NLS蛋白序列和3'UTR段。

优选地，在所述CasRx-N端序列远离所述N端序列荧光蛋白序列的一端，还连接有N端序列Intein序列。