[发明专利]一种仔猪用益生菌制剂的制备方法

权利要求书

1.一种仔猪用益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、筛选出耐抗生素的菌种进行培养发酵，制备得到益生菌菌泥；

步骤二、制备内层包被层，按重量份，称取胰蛋白胨1.3~1.5份，植酮1~2份，酵母粉2~6份，肝浸出物2~5份以及L-半胱氨酸盐酸盐溶液2~4份，混合搅拌得到泥状混合物，取步骤一制得的1~2份益生菌菌泥与泥状混合物混合，并在45~50℃的温度下烘干3h，得到固态益生菌混合物；

步骤三、制备中间脂质包被层；

步骤四、制备阻隔膜；

步骤五、制备外部包被胶囊，具体方法包括：按重量份称取0.2~0.6份的黄原胶，0.18~0.26份的海藻酸钠，1.3~1.8份的液体石蜡，1.3~1.66份的淀粉，将上述物质加入10~12份的无菌水中，搅拌均匀制得胶囊粗液，将胶囊粗液蒸发后得到外部包被胶囊；

步骤六、将步骤二制得的固态益生菌混合物包埋在步骤三制得的中间脂质包被层中，然后将步骤四制得的阻隔膜包埋在中间脂质层的外部，最后将步骤五制得的外部包被胶囊包埋在阻隔膜的外部，这样益生菌制剂便制备完成；

所述步骤四制备阻隔膜的具体方法包括：按重量份称取1~2份的纳米淀粉微球和0.08~0.1份的纳米二氧化硅粉末，将纳米淀粉微球溶解于无菌水中，先搅拌10~25min，再在600~1100rmp转速下离心2~5h，然后将纳米二氧化硅粉末加入至无菌水中，向混有纳米淀粉微球和纳米二氧化硅粉末的无菌水中加入交联剂，交联时间1~1.3h，然后向交联后的溶液中依次加入食用明胶0.4~0.6份，羧甲基纤维素钠0.8~1份，赖氨酸0.05~0.06份，再次搅拌1h，搅拌速率为250~300rmp；对搅拌后的混合溶液进行蒸发浓缩，直至含水量低于26％，得到胶状阻隔膜粗料；随后对蒸发浓缩后的胶状阻隔膜粗料进行改性，得到阻隔膜；

所述步骤四中的交联剂为氯化钙、柠檬酸钠、柠檬酸钾或三偏磷酸钠中的一种；

所述步骤四中对胶状阻隔膜粗料进行改性的方法包括：

步骤S41、将蒸发浓缩后的胶状阻隔膜粗料平铺在细孔板表面，平铺厚度小于1mm，细孔板上开设有致密的小孔，小孔孔径为0.1~0.2mm；

步骤S42、在细孔板的下方放置一个中空的通气板，通气板的长、宽与细孔板相同，通气板的上表面开设有与细孔板小孔孔径一致的出气孔，将储存有氮气的气管与通气板连通，氮气从通气板的上表面逸出，并迅速透过胶状阻隔膜粗料，在胶状阻隔膜粗料中贯穿形成气孔，氮气的通气时间为25~40min；

步骤S43、使用表面光滑的平板缓慢压平胶状阻隔膜粗料，使胶状阻隔膜粗料表面保持平整；

步骤S44、将表面平整过的胶状阻隔膜粗料件低温冷冻，冷冻温度为﹣12~﹣4℃，冷冻时间为2h；

所述步骤三制备中间脂质层的方法包括：按重量份称取0.6~0.65份的甘油三酯，0.12~0.16份的鞘磷脂，1~2份的壳聚糖，3~6份的大豆粉以及0.1~0.22份的山楂粉，将上述物质混合后倒入体积量分数为20％的乙醇溶液中，在20~35rmp转速下搅拌40min，静置一段时间后将乙醇完全蒸发，再加入2~5份的无菌水，搅拌均匀后便制得中间脂质包被层材料；

所述步骤二制备内层包被层时，加入有崩解剂，崩解剂与胰蛋白胨的重量比为1比20，崩解剂为微晶纤维、羧甲基纤维素钠中的一种。

2.如权利要求1所述的仔猪用益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一中的益生菌菌种包括罗伊氏乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌。

3.如权利要求1所述的仔猪用益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一中对益生菌进行培养发酵的方法包括：

步骤S11、对筛选得到的益生菌进行活化，将益生菌采用划线接种的方式接种于活化培养基上，在37℃的温度下活化培养24~30h；

步骤S12、将活化培养的益生菌接种于液体培养基中，在37℃下兼性厌氧培养24~30h，得到益生菌发酵液；

步骤S13、在2500rmp转速下，对步骤S12制得的益生菌发酵液进行离心，离心时间为12~25min，静置后将下层沉淀滤除，取下层清液接种于灭菌后的发酵培养基中，并将发酵培养基放入发酵罐中，进行厌氧发酵，发酵时间为24~30h；

步骤S14、将经过步骤S13发酵后的益生菌发酵液低温冷冻干燥，得到益生菌菌泥。