[发明专利]一种纳豆芽孢杆菌及在纳豆发酵产纳豆激酶中的应用

权利要求书

1.一种纳豆芽孢杆菌，其特征在于，所述纳豆芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatlo)PZBn03，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.21541，保藏时间为2020年12月23日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为纳豆芽孢杆菌Bacillus natto。

2.权利要求1所述的纳豆芽孢杆菌在纳豆发酵产纳豆激酶中的应用。

3.一种具有溶栓效果的高活性纳豆激酶的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

1)以纳豆芽孢杆菌PZBn03对大豆进行发酵，待大豆成拉丝状，以清水：大豆比例为3:1的质量比进行清洗，少量多次，收集清洗液；

2)向清洗液中加入清洗液重量10％的麦芽糊精，搅拌至麦芽糊精溶解，冻干，得纳豆激酶。

4.根据权利要求3所述的一种具有溶栓效果的高活性纳豆激酶的制备方法，其特征在于，步骤1)中，以纳豆芽孢杆菌PZBn03对大豆进行发酵的过程为：

11)对纳豆芽孢杆菌PZBn03进行活化、扩培、离心，收集菌泥，再加入保护剂，115℃，20min灭菌，冻干，得纳豆芽孢杆菌PZBn03菌粉；其中，冻干条件为：压强0.065MPa，温度-54℃，时间6h；

12)将大豆进行蒸煮，水沸腾30min后，分离大豆和豆汁，对大豆继续进行蒸煮，蒸煮好备用，豆汁晾凉备用；

13)称取1g纳豆芽孢杆菌PZBn03菌粉活化于晾凉后的50ml豆汁中，需氧培养，37℃，24h，然后将活化好的纳豆芽孢杆菌PZBn03接种于自制的豆汁中进行扩培，需氧培养，37℃，24h，得纳豆芽孢杆菌PZBn03菌液；

14)将纳豆芽孢杆菌PZBn03菌液倒在蒸煮好的大豆表面，覆膜，发酵。

5.根据权利要求4所述的一种具有溶栓效果的高活性纳豆激酶的制备方法，其特征在于，步骤11)中，所述活化、扩培为：取原始纳豆芽孢杆菌PZBn03接种于MRS液体培养基中培养，需氧培养，37℃，24h，然后用接种针蘸取菌液划线于MRS固体培养基中培养，需氧培养，37℃，24h，再挑单菌落接种于MRS液体培养基中培养，需氧培养，37℃，24h，最后，吸取菌液扩培到MRS液体培养基中培养，需氧培养，37℃，24h。

6.根据权利要求5所述的一种具有溶栓效果的高活性纳豆激酶的制备方法，其特征在于，步骤11)中，所述保护剂包括：脱脂奶粉溶液45ml、乳糖溶液10ml、抗坏血酸溶液10ml、味精溶液10ml；且各溶液的溶质分别为9g、乳糖7.2g、9g、9g。

7.根据权利要求6所述的一种具有溶栓效果的高活性纳豆激酶的制备方法，其特征在于，步骤13)中，纳豆芽孢杆菌PZBn03的接种量为大豆质量的4％。

8.根据权利要求7所述的一种具有溶栓效果的高活性纳豆激酶的制备方法，其特征在于，步骤14)中，覆膜后，需在膜上开设小孔，再进行发酵。