[发明专利]一种纳豆芽孢杆菌及在纳豆发酵产纳豆激酶中的应用

说明书

本发明公开了一种纳豆芽孢杆菌，纳豆芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)PZBn03，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.21541，保藏时间为2020年12月23日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为纳豆芽孢杆菌Bacillusnatto；以该纳豆芽孢杆菌制备具有溶栓效果的高活性纳豆激酶，过程包括：以纳豆芽孢杆菌对大豆进行发酵，待大豆成拉丝状，以清水对大豆进行清洗，收集清洗液；向清洗液中加入麦芽糊精，搅拌至麦芽糊精溶解，冻干，得纳豆激酶；纳豆芽孢杆菌制备纳豆激酶，提高了纳豆激酶的活性。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，更具体地说是涉及一种纳豆芽孢杆菌及在纳豆发酵产纳豆激酶中的应用。

背景技术

血栓栓塞性疾病是一种常见的危害极大的心脑血管疾病，由血栓堵塞血管腔导致机体脏器出现缺血和梗死而引发机能障碍的各种疾病的总称。常表现为心肌梗死、缺血性脑梗死、缺血性脑梗死、静脉血栓栓塞和肺血栓栓塞等许许多多发病症状。血栓栓塞性疾病累及全身各个器官和系统，具有发病率，致残率，病死率和复发率高，并发症多的“四高一多”的特点。其发病率和死亡率居各种疾病之首。据统计，目前全世界每年约有1700万患者死于血栓性疾病，且仍呈高发态势，预计到2020年，该病导致的死亡人数将达到每年2500万。我国每年进行溶栓治疗的患者超过300万。因此，高效溶栓药物的研制备受关注。目前临床上常用的溶栓药物如尿激酶、蚓激酶和纤溶酶原激活剂等存在副作用大、价格昂贵、半衰期短等缺点。相比之下，微生物源纤溶酶，具有可口服、安全、高效、持久和廉价等优势，而日益引起人们的重视。在众多已报道的微生物纤溶酶中，纳豆激酶以其强大的溶栓效果备受青睐。

纳豆激酶是1987年日本学者从日本传统发酵食品纳豆中发现的一种具有显著纤溶活性的丝氨酸蛋白酶，由纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)产生。随后，研究人员在中国豆豉、韩国发酵豆制品等发酵食品中也发现了该酶。1992年首次对纳豆激酶基因aprN进行了克隆并对包含调控序列的1473bp的基因序列全长进行了测定。该酶的分子量为27.7kDa，是由275个氨基酸残基组成的单链多肽酶，在pH7～12的范围内具有强大的纤维蛋白溶解活性。

药理研究表明，纳豆激酶不但可以直接水解交联纤维蛋白，而且可以激活体内的尿激酶原转变成为尿激酶，刺激血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)，间接地通过降解和失活尿激酶和t-PA的抑制剂pAI-1，发挥溶解纤维蛋白的作用。此外，纳豆激酶具有抗胰酶水解的能力，在胃肠道中具有良好的稳定性，且可被肠道上皮吸收进入血液循环，因此可以通过口服来发挥溶栓作用。除了上述的溶抗栓功效，纳豆激酶还对高血压、阿尔茨海默症和玻璃体视网膜病变等疾病具有良好的疗效。目前制备纳豆激酶的方法主要以发酵豆类食品来制备，但是不同豆类食品制备过程中纳豆芽孢杆菌的数量和活性不同，以不同的纳豆芽孢杆菌进行发酵，最终得到的纳豆激酶的活性也不同。

因此，如何提供一种可以提高纳豆发酵过程中纳豆激酶活性的纳豆芽孢杆菌，并对其进行应用以提高纳豆激酶的活性和溶栓效果是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种可以提高纳豆发酵过程中纳豆激酶活性的纳豆芽孢杆菌，且提供了一种具有溶栓效果的高活性纳豆激酶的制备方法，以大豆为原料，提高了纳豆激酶的活性。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种纳豆芽孢杆菌，所述纳豆芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)PZBn03，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.21541，保藏时间为2020年12月23日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为纳豆芽孢杆菌Bacillus natto。

所述的纳豆芽孢杆菌在纳豆发酵产纳豆激酶中的应用。

一种具有溶栓效果的高活性纳豆激酶的制备方法，包括下述步骤：