[发明专利]一种生物耗材人基因组残留量的检测方法

说明书

本发明公开了一种生物基因技术，旨在提供一种生物耗材人基因组残留量的检测方法，其技术方案要点是包括以下步骤：S1，制备待检测材料阶段，随机抽取n（n≥3）件送检耗材并对其称重，稀释处置后备用；S2，制备检测对照组阶段，制备待检组、阴性对照组和阳性对照组；S3，PCR扩增阶段；S4，检测阶段，通过ABI7500荧光定量PCR仪中进行检测待检测材料中的荧光量；S5，重复检测阶段，制备不同浓度梯度的阳性对照组并重复步骤S2‑S5；S6，判定阶段，通过与阳性对照组比对荧光信号强度，判断待检测材料中是否含有人基因组。待检组的制备方法为，将检测试剂加入待检水中，检测试剂包括，灭菌超纯水、2x qPCR SYBR GREEN Mix、正向引物、反向引物、ROX dye和DNA模板。

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域…,更具体地说，它涉及一种生物耗材人基因组残留量的检测方法。

背景技术

生物耗材在生产过程中有时候携带人基因组的污染，会影响生物样本的纯度，目前对于生物耗材中是否携带有人基金组通常通过电泳法来判断，此方法只能定形判断且判断结果模糊，为此我们开发出来一种检测生物耗材中人基因组含量的方法，此方法基于利用荧光定量PCR试剂 SYBR GREEN同时检测预处理过生物耗材的水、阴性对照、不同梯度浓度的阳性对照（32，16，8，4，2pg）的荧光信号强度，实验组若无荧光信号则为合格。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种生物耗材人基金组残留量的检测方法。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种生物耗材人基因组残留量的检测方法，包括以下步骤，

S1，制备待检测材料阶段，随机抽取n（n≥3）件送检耗材并对其称重，稀释处置后备用；

S2，制备检测对照组阶段，制备待检组、阴性对照组和阳性对照组；

S3，PCR扩增阶段；

S4，检测阶段，通过ABI7500荧光定量PCR仪中进行检测待检测材料中的荧光量；

S5，重复检测阶段，制备不同浓度梯度的阳性对照组并重复步骤S2-S5；

S6，判定阶段，通过与阳性对照组比对荧光信号强度，判断待检测材料中是否含有人基因组。

本发明进一步设置为：步骤S1中，制备待检测材料阶段，随机抽取n（n≥3）件送检耗材并对其称重，按照10ml/g加入超纯水进行稀释，将待检测材料放入无菌袋中，加入PCR纯净的灭菌超纯水。

本发明进一步设置为：步骤S1中，处置方法为将待检测材料置于37℃水浴锅中1小时，结束后将待检测材料静置于室温中1小时候备用，记为待检水。

本发明进一步设置为：步骤S2中，制备待检组的制备方法为，将检测试剂加入待检水中，检测试剂包括，6μl的灭菌超纯水、10μl的2x qPCR SYBR GREEN Mix、长度为10μm的正向引物0.8μl、长度为10μm的反向引物0.8μl、0.4μl的ROX dye、重量为2pg的DNA模板2μl，试剂共计20μl。

本发明进一步设置为：步骤S2中，制备阴性对照组设置为将检测试剂加入灭菌超纯水中，灭菌超纯水体积与待检水体积相同。

本发明进一步设置为：步骤S2中，制备阳性对照组设置为将检测试剂加入带有人基因组的灭菌超纯水中，灭菌超纯水体积与待检水体积相同。

本发明进一步设置为：步骤S2中，通过Pubmed（生物技术数据库）制备合适引物，正向引物设置为从5′向3′方向读出DNA正链的序列，反向引物即为下游引物且沿着正链进行延长。

本发明进一步设置为：步骤S5中，将检测试剂中的DNA模板依次分别设置为4pg、8pg、16pg和32pg进行重复检测。

本发明进一步设置为：步骤S6中，将待检组分别与阳性实验组和阴性实验组进行对照荧光信号强度，待检组无荧光信号则视为合格。