[发明专利]一种由22-甾醇作为原料合成胆固醇和25-羟基胆固醇的新方法

权利要求书

1.一种以22-羟基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮（4-BA）作为原料合成胆固醇及25-羟基胆固醇的方法，其特征在于，以植物甾醇发酵产物22-羟基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮（4-BA）为原料，包括以下步骤：

1）3位羰基保护：22-羟基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮（4-BA）用对甲苯磺酸催化，与四氢吡咯或者乙二醇反应，反应温度10-120℃，反应3-5小时后用碳酸氢钠终止反应，经水析，过滤得到21-羟基-20-甲基孕甾-3-四氢吡咯-3,5-二烯或者21-羟基-20-甲基孕甾-3-乙二醇-5-烯；

2）磺化反应：21-羟基-20-甲基孕甾-3-四氢吡咯-3,5-二烯或者21-羟基-20-甲基孕甾-3-乙二醇-5-烯在二氯甲烷或者二氯乙烷中，三乙胺或二异丙基乙基胺条件下与对甲苯磺酰氯，甲磺酰氯，三氟甲磺酸酐，氟代磺酰氟反应，经水洗，提取，浓缩得到22-磺酰基化合物；

3）取代反应：22-磺酰基化合物与格式试剂异戊基溴化镁在四氢呋喃溶剂中加成反应，后经酸淬灭，分液，浓缩得到3位保护的胆甾烷或者3位保护25-羟基的胆甾烷；

4）乙酰化反应：3位保护的胆甾烷或者3位保护25-羟基的胆甾烷，在乙酸、乙酸酐条件下3位保护基交换反应，蒸干乙醇结晶得到3-乙酰基-3,5-二烯胆甾烷或3-乙酰基-25-羟基-3,5-二烯胆甾烷；

5）还原反应：3-乙酰基-3,5-二烯胆甾烷或3-乙酰基-25-羟基-3,5-二烯胆甾烷溶解于乙二醇二甲醚、四氢呋喃中用硼氢化钠，硼氢化钾，硼氢化锌，硼氢化钙或者还原酶反应得到胆固醇或者25-羟基胆固醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）所述3-羰基保护反应中各反应物的重量比为：21-羟基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮：四氢吡咯或者乙二醇=1.0：1.0~5.0：1.0~5.0。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）所述3-羰基保护反应在有机溶剂中进行，所述溶剂为乙醇、甲醇、甲苯中的一种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）所述磺化反应以三乙胺、二异丙基乙基胺等作碱在二氯甲烷溶剂里与对甲苯磺酰氯，甲磺酰氯，三氟甲磺酸酐，氟代磺酰氟反应得到22-磺酸酯。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）所述取代反应用格式试剂异戊基溴化镁、异戊基溴化锂、3-三甲基硅氧基-3甲基丁基溴化镁等试剂反应，其反应物摩尔比为：22-磺酸酯：异戊基溴化镁=1：3~10。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）所述格氏试剂取代反应，需要亚铜盐作为催化剂，所用亚铜盐为溴化亚铜，溴化亚铜二甲硫醚，氯化亚铜，碘化亚铜以及二价铜盐四氯铜锂，反应摩尔比为1：0.1~1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5）所述3-乙酰基-3,5-二烯胆甾烷或3-乙酰基-25-羟基-3,5-二烯胆甾烷溶解于乙二醇二甲醚，四氢呋喃中，加入硼氢化钠，反应产物萃取乙醇结晶得到胆固醇或者25-羟基胆固醇，3-乙酰基-3,5-二烯胆甾烷：硼氢化钠摩尔比=1.0：0.25~1。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5）所述还原化反应3-乙酰基-25羟基-3,5-二烯胆甾烷或3-乙酰基 -3,5-二烯胆甾烷在甲基叔丁基醚磷酸缓冲溶液用羰基还原酶还原得到胆固醇或者25-羟基胆固醇，还原反应过程中滴加氢氧化钙悬浊液维持反应液PH约等于7-7.5。

9.如权利要求1-8任一项所述的方法制备的胆固醇或者25-羟基胆固醇。