[发明专利]一种蓝莓天然酵母Bob1及其筛选方法和应用在审
申请号: | 202111370897.3 | 申请日: | 2021-11-18 |
公开(公告)号: | CN114196557A | 公开(公告)日: | 2022-03-18 |
发明(设计)人: | 曾令文;孙如梦;吉姆·哈迪;张爱华;呼和涛力;孙小强 | 申请(专利权)人: | 常州大学 |
主分类号: | C12N1/16 | 分类号: | C12N1/16;C12N1/02;C12G3/024;C12R1/84 |
代理公司: | 北京市诚辉律师事务所 11430 | 代理人: | 范盈;李玉娜 |
地址: | 213164 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 蓝莓 天然 酵母 bob1 及其 筛选 方法 应用 | ||
1.一种蓝莓天然酵母Bob1,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.23757。
2.如权利要求1所述的一种蓝莓天然酵母Bob1的筛选方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)取新鲜蓝莓无菌破碎处理后密闭,置于生化培养箱中培养,待有CO2产生后,取发酵液用无菌水稀释,得到稀释液;
(2)将上述步骤(1)得到的稀释液涂布于含有氯霉素的沙保罗下层培养基中,在通风条件下恒温培养后,置于沙保罗上层培养基中,在密闭环境中避光倒置培养1-3h;
(3)挑取显深红色的菌株,接种于酵母固体培养基上,在通风条件下恒温培养,选取具有典型酵母特征的单菌落,进行3-4次平板划线,得到单个菌落接种至酵母固体培养基中培养,稀释后接种至鉴别培养基上纯化培养,挑取纯菌株,并对纯菌株进行镜检;
(4)采用试剂盒提取法提取上述步骤(3)得到的纯菌株的基因组DNA,以ITS1和ITS4为引物,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳检测,得到基因序列;
(5)进行生长性能分析和理化性质分析,筛选得到蓝莓天然酵母Bob1。
3.如权利要求2所述的筛选方法,其特征在于所述步骤(1)中培养的条件为:培养温度28-30℃,培养时间1-3d,所述发酵液与无菌水的稀释比例为1-2:1-2,优选1:1。
4.如权利要求2所述的筛选方法,其特征在于所述步骤(2)中恒温培养条件为:培养温度28-30℃,培养时间24-28h,所述稀释液的浓度为10-4-10-6。
5.如权利要求2所述的筛选方法,其特征在于所述步骤(3)中恒温培养条件为:培养温度28-30℃,培养时间1-3d,所述稀释后菌种的浓度为10-4-10-6。
6.如权利要求2所述的筛选方法,其特征在于所述步骤(3)中镜检的具体操作为:将挑取的纯菌种经草酸铵结晶紫染色,再置于显微镜下观察细胞形状,大小及繁殖方式。
7.如权利要求2所述的筛选方法,其特征在于所述步骤(4)中PCR扩增的体系为:总体积20μL,顺序加入PrimestarMax 10μL,引物ITS1和ITS4各0.5μL,基因组DNA 0.3μL,无菌水8.7μL。
8.如权利要求2所述的筛选方法,其特征在于所述步骤(4)中PCR扩增的过程为:98℃预变性5min,98℃变性30s,56℃退火20s,72℃延伸30s,共31次循环,最后10℃充分延伸5min。
9.一种蓝莓果酒,其特征在于所述蓝莓果酒由如权利要求1所述的蓝莓天然酵母Bob1发酵酿造得到的。
10.如权利要求1所述的蓝莓天然酵母Bob1在蓝莓果酒发酵中的应用。
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